Galleria dell’ Accademia har inrymt den ursprungliga David av Michelangelo sedan 1873. Skulpturen påstås ha kommit till Accademia av bevarandeskäl, även om andra faktorer var inblandade i flytten från dess tidigare utomhus läge på Piazza della Signoria. Den ursprungliga avsikten var att skapa ett ”Michelangelo museum”, med ursprungliga skulpturer och ritningar, för att fira den fjärde hundraårsminnet av konstnärens födelse., Idag innehåller galleriet en liten samling av Michelangelos verk hans fyra oavslutade fångar, avsedda för påven Julius II: s grav, och en staty av Sankt Matteus, också oavslutad. 1939 förenades dessa av Palestrina Pietà, som upptäcktes i barberinikapellet i Palestrina, men experter anser nu att dess tillskrivning till Michelangelo är tvivelaktig.,

andra verk som visas är florentinska målningar från 1200-och 1500-talen, inklusive verk av Paolo Uccello, Domenico Ghirlandaio, Sandro Botticelli och Andrea del Sarto; och, från högrenässansen, Giambolognas ursprungliga fullstor gips modello för våldtäkt av Sabine kvinnor. Förutom ett antal florentinska Gotiska målningar, inrymmer galleriet samlingen av ryska ikoner monterade av Grand Dukes av huset Lorraine, varav Leopoldo var en.