i celler och i labbet används enzymer som kallas ligaser för att ansluta fragment av DNA tillsammans. Endast DNA-fragment som har matchande, kompletterande ändar kan förenas med ligering.
hur fungerar ligaser?
ligaser förenar fragment av DNA tillsammans genom att katalysera bildandet av bindningar mellan angränsande nukleotider.,
ligering i celler
celler utför naturligt ligering under DNA-replikering, när Okazaki-fragmenten förenas. Celler använder också ligering för att reparera DNA som har skadats, antingen genom normal cellmetabolism eller av miljöfaktorer, såsom UV-ljus eller strålning. Upp till 1 miljon raster kan förekomma i DNA hos en enda mänsklig cell varje dag.,
ligering i labbet
för att DNA-ligering ska ske i labbet måste reaktionsblandningen innehålla: komplementära DNA-fragment, en ligasebuffer och en energikälla. Energin för denna reaktion kommer normalt från en kemikalie som kallas ATP (adenosintrifosfat).
att få DNA-fragmenten
DNA bereds för ligering genom att skäras i fragment med restriktionsenzymer. Varje restriktionsenzym skär DNA på en specifik plats och gör fragment som har antingen ”trubbiga” eller ”klibbiga” ändar.,
sammanfogning av DNA-fragment
ligaser kan ansluta sig till eventuella DNA-fragment med ”trubbiga” ändar. De kan också ansluta sig till DNA-fragment med ”klibbiga” ändar, men endast om nukleotiderna på strängarna är komplementära. För att få kompletterande ”klibbiga ändar” måste de DNA-fragment som ska förenas skäras med samma begränsningsenzym.
Lämna ett svar