I celler og i laboratoriet, enzymer som kalles ligases er vant til å bli med fragmenter av DNA sammen. Bare DNA-fragmenter som har samsvarende, utfyllende ender kan være sammen med ligation.
Hvordan gjøre ligases arbeid?
Ligases bli med fragmenter av DNA sammen ved å katalysere dannelsen av båndene mellom nærliggende nukleotider.,
Ligation i cellene
Celler naturlig gjennomføre ligation under DNA replikasjon, når Okazaki-fragmenter er koblet sammen. Cellene også bruke ligation til å reparere DNA som har blitt skadet, enten ved normal celle metabolisme eller av miljømessige faktorer, som for eksempel UV-lys eller stråling. Opp til 1 million pauser kan oppstå i DNA av et enkelt menneske celle hver dag.,
Ligation i laboratoriet
For DNA ligation til å skje i laboratoriet, reaksjonsblandingen må inneholde: komplementære DNA-fragmenter, en ligasebuffer, og en kilde til energi. Energien for denne reaksjonen kommer normalt fra en kjemisk kalt ATP (adenosin trifosfat).
Få DNA-fragmenter
DNA er forberedt for ligation ved som kappes i fragmenter med restriksjon enzymer. Hver restriction enzym som kutter DNA på et bestemt nettsted, og gjør fragmenter som har enten ‘butt’ eller ‘sticky’ ender.,
Bli med DNA-fragmenter
Ligases kan bli noen DNA-fragmenter med ‘butt’ ender. De kan også bli med DNA-fragmenter med «trege» ender, men bare hvis nukleotider på trådene er komplementære. For å få utfyllende «sticky ends’ DNA-fragmentene for å være medlem må være kuttet med samme begrensning enzym.
Legg igjen en kommentar