i celler og i laboratoriet bruges en .ymer kaldet ligaser til at forbinde fragmenter af DNA sammen. Kun DNA-fragmenter, der har matchende, komplementære ender, kan forbindes med ligering.
Hvordan virker ligaser?
Ligaser forbinder fragmenter af DNA sammen ved at katalysere dannelsen af bindinger mellem nabonukleotider.,
Ligation i celler
Celler naturligt udføre ligation under DNA-replikation, når Okazaki-fragmenter er sat sammen. Celler bruger også ligering til at reparere DNA, der er blevet beskadiget, enten ved normal cellemetabolisme eller af miljømæssige faktorer, såsom UV-lys eller stråling. Op til 1 million pauser kan forekomme i DNA fra en enkelt human celle hver dag.,
ligering i laboratoriet
for at DNA-ligering kan forekomme i laboratoriet, skal reaktionsblandingen indeholde: komplementære DNA-fragmenter, en ligasebuffer og en energikilde. Energien til denne reaktion kommer normalt fra et kemikalie kaldet ATP (adenosintrifosfat).
at få DNA-fragmenterne
DNA fremstilles til ligering ved at blive skåret i fragmenter med restriktionsen .ymer. Hvert restriktionsen .ym skærer DNA på et bestemt sted og laver fragmenter, der enten har ‘stumpe’ eller ‘klæbrige’ ender.,
sammenføjning af DNA-fragmenter
ligaser kan slutte sig til alle DNA-fragmenter med ‘stumpe’ ender. De kan også slutte sig til DNA-fragmenter med ‘klæbrige’ ender, men kun hvis nukleotiderne på strengene er komplementære. For at få komplementære ‘klæbrige ender’ skal de DNA-fragmenter, der skal sammenføjes, skæres med det samme restriktionsen .ym.
Skriv et svar