în celule și în laborator, enzime numite ligaze sunt folosite pentru a uni fragmente de ADN împreună. Numai fragmente de ADN care au capete complementare de potrivire pot fi unite prin ligare.
cum funcționează ligazele?
Ligazele unesc fragmente de ADN împreună prin catalizarea formării legăturilor dintre nucleotidele vecine.,
ligarea în celule
celulele efectuează în mod natural ligarea în timpul replicării ADN, când fragmentele Okazaki sunt unite. Celulele folosesc, de asemenea, ligarea pentru a repara ADN-ul care a fost deteriorat, fie prin metabolismul celular normal, fie prin factori de mediu, cum ar fi lumina UV sau radiațiile. Până la 1 milion de pauze pot apărea în ADN-ul unei singure celule umane în fiecare zi.,pentru ca ligarea ADN să aibă loc în laborator, amestecul de reacție trebuie să conțină: fragmente de ADN complementare, un ligasebuffer și o sursă de energie. Energia pentru această reacție provine în mod normal de la o substanță chimică numită ATP (adenozin trifosfat).
obținerea fragmentelor de ADN
ADN-ul este pregătit pentru ligare prin tăierea în fragmente cu enzime de restricție. Fiecare enzimă de restricție taie ADN – ul într-un anumit loc și produce fragmente care au capete „contondente” sau „lipicioase”.,
alăturarea fragmentelor de ADN
Ligazele pot uni orice fragmente de ADN cu capete „contondente”. De asemenea, se pot alătura fragmente de ADN cu capete „lipicioase”, dar numai dacă nucleotidele de pe fire sunt complementare. Pentru a obține „capete lipicioase” complementare, fragmentele de ADN care trebuie îmbinate trebuie tăiate cu aceeași enzimă de restricție.
Lasă un răspuns