in cellen en in het lab worden enzymen, ligases genaamd, gebruikt om fragmenten van DNA samen te voegen. Slechts de fragmenten van DNA die aanpassing, complementaire einden hebben kunnen door afbinding worden aangesloten.
Hoe werken ligases?
ligasen voegen fragmenten van DNA samen door de vorming van bindingen tussen naburige nucleotiden te katalyseren.,
ligatie in cellen
cellen leggen op natuurlijke wijze ligatie uit tijdens DNA-replicatie, wanneer de Okazaki-fragmenten worden samengevoegd. De cellen gebruiken ook ligation om DNA te herstellen dat, hetzij door normaal celmetabolisme of door milieufactoren, zoals UV-licht of straling is beschadigd. In het DNA van één enkele menselijke cel kunnen dagelijks tot 1 miljoen breuken optreden.,
ligatie in het lab
om DNA ligatie in het lab te kunnen voorkomen, moet het reactiemengsel bestaan uit: complementaire DNA-fragmenten, een ligasebuffer en een energiebron. De energie voor deze reactie komt normaal gesproken uit een chemische stof genaamd ATP (adenosine trifosfaat).
het verkrijgen van de DNA-fragmenten
DNA wordt bereid voor ligatie door in fragmenten te worden gesneden met restrictie-enzymen. Elk beperkingsenzym snijdt DNA op een specifieke plaats en maakt fragmenten die of ‘stompe ‘ of’ kleverige ‘ einden hebben.,
samenvoegen van DNA-fragmenten
ligasen kunnen zich aansluiten bij DNA-fragmenten met’ stompe ‘ uiteinden. Zij kunnen zich ook aansluiten bij de fragmenten van DNA met ‘kleverige’ einden, maar slechts als de nucleotiden op de bundels complementair zijn. Om complementaire ‘kleverige einden’ te krijgen moeten de te verbinden fragmenten van DNA met hetzelfde beperkingsenzym worden gesneden.
Geef een reactie