dans les cellules et en laboratoire, des enzymes appelées ligases sont utilisées pour joindre des fragments d’ADN. Seuls les fragments D’ADN qui ont des extrémités complémentaires peuvent être joints par ligature.
comment fonctionnent les ligases?
Les Ligases joignent des fragments d’ADN en catalysant la formation de liaisons entre les nucléotides voisins.,
la Ligature dans les cellules
Cellules naturellement effectuer la ligature au cours de la réplication de l’ADN, lorsque les fragments d’Okazaki sont réunis. Les cellules utilisent également la ligature pour réparer L’ADN qui a été endommagé, soit par le métabolisme cellulaire normal, soit par des facteurs environnementaux, tels que la lumière UV ou le rayonnement. Jusqu’à 1 million de ruptures se produisent dans l’ADN d’une seule cellule humaine chaque jour.,
ligature en laboratoire
pour que la ligature de l’ADN se produise en laboratoire, le mélange réactionnel doit contenir: des fragments d’ADN complémentaires, un tampon de ligature et une source d’énergie. L’énergie de cette réaction provient normalement d’un produit chimique appelé ATP (adénosine triphosphate).
obtention des fragments D’ADN
L’ADN est préparé pour la ligature en étant coupé en fragments avec des enzymes de restriction. Chaque enzyme de restriction coupe L’ADN à un site spécifique et produit des fragments qui ont des extrémités « émoussées » ou « collantes ».,
joindre des fragments D’ADN
Les Ligases peuvent joindre n’importe quel fragment d’ADN avec des extrémités « émoussées ». Ils peuvent également joindre des fragments D’ADN avec des extrémités « collantes », mais seulement si les nucléotides sur les brins sont complémentaires. Pour obtenir des « extrémités collantes » complémentaires, les fragments D’ADN à joindre doivent être coupés avec la même enzyme de restriction.
Laisser un commentaire