absztrakt
Trichomonas vaginalis, flagellate protozoan, a kórokozója trichomonosis, a leggyakoribb nonvirális nemi úton terjedő betegség világszerte. Figyelembe véve a metronidazol-rezisztens izolátumok megnövekedett prevalenciáját, az alternatív gyógyszerek elengedhetetlenek a sikeres kezeléshez. A természetes termékek a legtöbb új gyógyszer forrása, a gyógynövények használatának népszerű bölcsessége pedig hatékony eszköz ebben a keresésben., Ebben a vizsgálatban a Mbyá-Guarani bennszülött csoport által a mindennapi életben széles körben használt 10 gyógynövény aktivitását hét különböző T. vaginalis izolátummal szemben értékelték. A vizsgált vizes kivonatok közül a Verbena sp. (Guachu ka ‘ a Mbyá-Guarani nyelven) és Campomanesia xanthoarpa (Guavira Mbyá-Guarani nyelven) a legmagasabb aktivitást mutatta a T. vaginalis ellen, amelynek MIC értéke 4,0 mg/mL volt, elérve a parazita elleni hatásosság 100% – át. A kinetikus növekedési vizsgálatok azt mutatták, hogy a kivonatok elősegítették a teljes növekedés eltörlését 4 óra inkubálás után., Ezenkívül a vizsgált kivonatok nem elősegítették a humán eritrociták elleni jelentős hemolitikus aktivitást. Eredményeink először mutatják a Verbena sp potenciális aktivitását. és C. xanthoarpa T. vaginalis ellen. Ezenkívül ez a tanulmány azt mutatja, hogy az őslakos tudás fontos forrása az új prototozoális szerek prototípusának.
1. Bevezetés
a Trichomonas vaginalis parazitálja az urogenitális emberi traktust, amely trichomonózist okoz, amely világszerte a legelterjedtebb nem vírusos szexuális úton terjedő betegség, amely évente 248 millió új esetért felelős ., Kolonizáció után a parazita okoz hüvelygyulladás, húgycsőgyulladás, prosztatagyulladás . Továbbá a kórokozó súlyos következményekkel jár, mint a terhesség kedvezőtlen kimenetele és a koraszülés, a meddőség , a méhnyakrákra való hajlam, valamint a kismedencei gyulladásos betegség . Fontos, hogy a trichomonosis a humán immundeficiencia vírus (HIV) transzmisszió és akvizíció kofaktoraként működik . Ennek a fertőzésnek a hatása ellenére a terápiás arzenál korlátozott, és csak a metronidazol és a tinidazol, mind az 5-nitroimidazol gyógyszereket az FDA hagyja jóvá a trichomonosis kezelésére ., Bár a gyógyulási arány magas, a kezelés sikertelensége megfigyelhető, és a kezelés sikertelenségének fő oka a T. vaginalis izolátumok rezisztenciája . Ebben az értelemben kétségtelenül szükséges a trichomonosis kezelésére szolgáló új alternatívák és két stratégia vizsgálata: i. új terápiás célok keresése, amelyek elengedhetetlenek az új parazitaellenes szerek ésszerű fejlődéséhez és ii. az új Anti-t vizsgálata., a vaginalis vegyületek szerkezetileg különböznek az 5-nitroimidazoloktól, következésképpen különböző mechanizmusokkal hatnak, amint azt a csoportunk bizonyítja .
ebben az összefüggésben a természetes termékek, különösen a gyógynövények, mérhetetlenek, mint a bioaktív molekulák erős forrása. Az ősi idők óta az emberek növényeket használnak a gyakori fertőző betegségek kezelésére, ezeknek a hagyományos gyógyszereknek egy része még mindig integrálódik a különböző patológiák gyógyításának részeként . Ezenkívül az etnofarmakológiai információkon alapuló keresés megmenti a növények felhasználásának óriási empirikus tudását ., Ebben az összefüggésben, ami a természeti környezetet és a genetikai erőforrások hatalmas gazdagságát illeti, Brazília az etnofarmakológia iránt nagy érdeklődésre számot tartó ország .
Az őslakosok rengeteg biodiverzitási információval rendelkeznek, és tudják, hogyan kell megragadni és felhasználni a természeti erőforrásokat . Annak ellenére, hogy számos gyógyszert hagyományos gyógymódok és népi ismeretek segítségével fedeztek fel, Brazíliában 122 őslakos etnikai csoport létezik, de csak 30% – át vizsgálták az etnobotanikai szempontok tekintetében ., Ezért az őslakos orvoslás által használt növények tanulmányozása fontos a hagyományos orvoslás és a biotikus környezet összekapcsolásához, megőrizve az őslakos ősi tudást.
a parazita protozoák továbbra is komoly veszélyt jelentenek az emberi és állati egészségre, és kevés hatékony gyógyszer áll rendelkezésre számos protozoális betegség kezelésére. Figyelembe véve az őslakos etnofarmakológiát, mint az antiprotozoális aktivitással rendelkező növények szisztematikus szűrésének hozzájárulóját, ez a tanulmány értékelte az anti-T-T., vaginalis aktivitás a legfontosabb gyógynövények használt Mbyá-Guarani őshonos gyógyszer Dél-Brazíliában.
2. Anyagok és módszerek
2.1. Parazita tenyészet feltételek
ebben a vizsgálatban hét t izolátum., vaginalis használták: 30236 és 30238 amerikai típusú kultúra gyűjtemény (ATCC); TV-LACM1, TV-LACM2, és TV-LACM3 (friss klinikai izolátumok női betegek); TV-LACH1 és TV-LACH2 (friss klinikai izolátumok férfi betegek) mind Laboratório de Análises Clínicas e Toxikológicas, Faculdade de Farmácia, UFRGS, Brazília (projekt etikai jóváhagyásával UFRGS etikai Kutatási Bizottság, szám 18923). A trichomonadokat axenikusan tenyésztették triptikáz-élesztőkivonat-maltóz (TYM) közegben (pH 6.0), kiegészítve 10% hő-inaktivált szarvasmarha szérummal, és 37°C-on inkubálták .
2.2., Növényi anyag
a növényi anyagot a Lomba do Pinheiro, Porto Alegre, RS, Brazília (30°06’47.62″ S és 51°07’37.85″) törzséből gyűjtötték össze 2011 márciusában. A faluban Tekoá Anhetenguá (Angolul: True Village), a környéken 200 ember él, akik 40 családnál gyűltek össze. A falu asszonyai ismerik a teljes lakosság által használt gyógynövényeket, és a példányok gyűjtését végzik. Tíz növényt gyűjtöttek össze az őslakos gyógyászatban a fertőző betegségek kezelésére: az Aloe arborescens Malom leveleit., (ICN 173371), Bidens pilosa L. légi részei( ICN 167397), Rhipsalis baccifera légi részei (ICN 167402), Luehea divaricata barkjai (ICN 167403), trichilia SP gyökerei. (ICN 173126), campomanesia xanthoarpa O. Berg levelei. (ICN 167401), Coix lacryma-jobi Lin levelei. (ICN 167396), citrus limonium levelei (ICN 167399), Citrus reticulata levelei (ICN 173127) és Verbena sp levelei. (ICN 167394). Az utalvány példányait az Universidade Federal do Rio Grande do Sul (ICN) herbáriumában helyezték el.
2.3., Növényi kivonatok készítése
a friss növényi kivonatokat az őslakosok hagyományos használatának megfelelően 60°C-on 60 percig főzéssel készítették . Vizes kivonatok voltak fagyasztva szárított, valamint a munka oldatot a 8.0 mg/mL ultratiszta víz, sterilizált szűréssel (0.22 µm), illetve a tárolt -20°C.
2.4. Anti-Trichomonas vaginalis vizsgálat
tíz vizes kivonatot vizsgáltunk in vitro a T. vaginalis elleni aktivitásra. A vizsgálatot 96 mikrotiterlemezen végeztük, 4,0 mg/mL végső koncentrációban a kutakban., A gátló minimális koncentrációt (MIC) nyolcszoros hígítással (4,0–0,031 mg/mL) határoztuk meg, a trofozoiták életképességét fluorimetriás módszerrel határoztuk meg . Két kontrollt végeztek: negatív kontrollt csak trofozoitokkal és pozitív kontrollt 8,0 µM metronidazollal (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA). A kísérleteket legalább három független kísérletben, három példányban végezték el. Az eredményeket az életképes trofozoiták százalékában fejezték ki a kezeletlen parazitákhoz képest.
2, 5., A vizes kivonatok növekedési hatása
az aktív vizes kivonatok T. vaginalis növekedésre gyakorolt hatásának vizsgálata érdekében kinetikus növekedési görbét végeztünk az ATCC 30236 izolátum alkalmazásával. A paraziták kezdeti sűrűsége 2,0 × 105 trofozoit/mL volt inkubáljuk kivonatok MIC érték TYM közegben. A trofozoitokat 72 órán keresztül hemocitométerrel számoltuk. az eredményeket trofozoitszámban (105/mL) fejeztük ki., A mikroszkopikus elemzése, az ellenőrzések kezelt paraziták voltak centrifugált 10 perc 2000 ford / perc koncentrálni a szervezetek után 4 h inkubálás, majd a készítmény volt megfigyelhető a fény mikroszkóp (nagyított ×1,000) által trypan kék festék kizárás.
2.6. Hemolitikus vizsgálat
ezt a vizsgálatot a Rocha et al. . Az egészséges önkéntesektől származó O vércsoport pozitív volt Alsever oldatával (1 : 1), majd 2000 fordulat / perc sebességgel centrifugálták 5 percig. Az eritrocita frakciót háromszor mossuk PBS 1x-szel (pH 7.,0) és reszuszpendált, hogy 1% vörösvértest szuszpenziót (v/v) adjon. A vizes kivonatok koncentrációját az érzékenységi vizsgálatban meghatározott minimális gátló koncentráció (MIC) szerint választottuk ki. A vörösvértestek volt inkubáljuk a kivonatok, 37°C alatt nyugtalanság 1 h aztán voltak centrifugált 3000 rpm, 5 perc. A felülúszó abszorbanciáját 540 nm-en mértük. A kísérletet három példányban végezték el, és az egyes vizsgált minták által okozott hemolízis százalékos arányát a saponin 100% – os hemolitikus aktivitásához viszonyítva számították ki a Quillaja saponaria-ból .
3., Eredmények és megbeszélések
Ez a vizsgálat a Mbyá-Guarani gyógyszerrendszerben használt 10 gyógynövény vizes kivonatainak Anti-T. vaginalis aktivitását értékelte. Fontos, hogy a vizsgált növények között két vizes kivonatot találtunk, amelyek erős anti-T. vaginalis in vitro aktivitással rendelkeznek. Az ígéretes kivonatok a Verbena sp. és Campomanesia xanthoarpa. A kivonat Verbena sp., 4,0 mg/mL-en, minden különálló trichomonads izolátumon (1.ábra a)) teljes citotoxicitást (a paraziták halálának 100% – át) okozó optimális anti-T. vaginalis aktivitást igazolták., A Campomanesia xanthoarpa leveleinek kivonata ugyanabban a koncentrációban szintén nagyon magas anti-T. vaginalis aktivitást mutatott, csökkentve a parazita életképességét 96% – ig (1.ábra b)).
más vizes kivonatok különböző eredményeket mutattak. A Bidens pilosából nyert vizes kivonat teljesen eltörölte a trofozoitok életképességét csak a 30236 izolátum (1.ábra c)). A luehea divaricata barkjainak kivonata a vizsgált trichomonads-izolátumokban eltérően csökkentette a T. vaginalis életképességét(1. ábra d))., A Coix lacryma-jobi levelei átlagosan 75% – kal csökkentették a T. vaginalis izolátumok életképességét; azonban a TV-LACH2 izolátum esetében a csökkenés csak 40% volt (1.ábra e))). A férfi betegek (TV-LACH1 és TV-LACH2) friss klinikai izolátumai nagyobb érzékenységet mutattak, mint a női betegek izolátumai (ATCC és fresh clinical), amikor a trichilia sp gyökérkivonata volt. tesztelték(1. ábra f)). A Citrus limoniumból származó levelek kivonata körülbelül 40% – kal csökkentette az izolátumok életképességét(1.ábra g))., Az Aloe arborescens és a Citrus reticulata kivonatai legalább egy izolátum (1.h) és 1. I) 50%-ának életképességét csökkentették, míg a Rhipsalis baccifera csak 30% – kal csökkentette a 30236 és a TV-LACM2 izolátumok életképességét(1. ábra j)).
a többi kivonathoz képest a Verbena sp kivonatai. a C. xanthoarpa a legígéretesebb aktivitást mutatta a T. vaginalis ellen, a minimális gátló koncentrációt pedig a 30236 izolátum esetében határozták meg (1.táblázat).,
|
|||||||||||||||||||||
a legaktívabb kivonat parazita növekedésre és életképességre gyakorolt hatásának vizsgálata érdekében kinetikus növekedési görbét végeztünk. A kontroll a klasszikus növekedési csúcsot 24 órás inkubáció után mutatta ki; azonban a Verbena sp kivonataival kezelt szervezetek. és C., a xantokarpa 4 óra inkubálás után teljes növekedést váltott ki (2.ábra), és jellegzetes kék színt mutatott a trypan kék festék kizárásával, jelezve a sejtek halálát (3. ábra).
Kinetikus növekedési görbe a Trichomonas vaginalis 30236 különíteni a kezelés után a vizes kivonatok Igaz, sp. és Campomanesia xanthoarpa 4,0 mg/mL-en. A trofozoiták növekedését a kivonatok teljesen gátolták az inkubáció 4 órájában., Data represent means ± standard deviation of at least three experiments, all in triplicate.
(a) Control
(b) Verbena sp.
(c) Campomanesia xanthocarpa
(a) Control
(b) Verbena sp.,
(c) campomanesia xanthoarpa
A C. xanthoarpa és a Verbena sp lehetséges hatásának vizsgálata céljából., a paraziták membránján lévő kivonatok, valamint az emlős sejtekkel szembeni citotoxicitásra vonatkozó előzetes adatok, ezen kivonatok hemolitikus aktivitását végezték. A verbéna sp. a C. xanthocarpa kivonatokat MIC-értéken tesztelték, és 6, 5, illetve 7, 6% eritrociták lízisét igazolták (1.táblázat). Ezek az eredmények azt mutatták, hogy mind a kivonatok, a MIC értékek, nem elősegítése jelentős hemolitikus tevékenység, jelezve, hogy a hatásmechanizmus felelős a parazita életképesség csökkenése valószínűleg nem jár parazita membrán zavar., Sőt, ami még fontosabb, ezek az eredmények arra utalnak, hogy mindkét kivonat nem mérgező az emlős sejtekre, mivel nem lysse humán eritrocitákat.
Ez a tanulmány hozzájárul a gyógynövényekkel kapcsolatos bennszülött ismeretek megmentéséhez. Az őshonos Mbyá-Guarani a Verbena sp. (Guachu ka ‘ a Mbyá-Guarani nyelven), mint tea, a fertőző betegségek, például a láz tüneteinek enyhítésére. Ez egyetért a Verbena sp-vel kapcsolatos irodalommal. infúzió, mint nyugtató, fájdalomcsillapító gyulladásos betegségek, bőr égési sérülések, amenorrhoea, depresszió, gyomor betegségek ., Ezenkívül ez a faj számos kémiai összetevővel rendelkezik, mint flavonoid, iridoid glikozidok, fenilpropanoid glikozid, szterolok, triterpének és glikokonjugát, és a biológiai aktivitás részben tulajdonítható nekik . Ezenkívül ez a törzs a C. xanthoarpa (Guavira Mbyá-Guarani nyelven) leveleit használja hasmenés, gyomorfájdalom és férgek kezelésére., Ez a növény hagyományosan használt dél-Brazília, mint depurative, antidiarrhoeic, tisztító, valamint antirheumatic, valamint csökkenti a vér koleszterinszintjét , s ezek a tulajdonságok is tulajdonítható, hogy a tanninok, szaponinok, valamint a flavonoidok (kvercetin, myricetin, quercitrin, valamint rutinról), vegyületek jelen a levelek C. xanthocarpa .
a növények történelmi felhasználásainak mentési etnofarmakológiája értékes a bioprospekció szempontjából, mivel megengedik maguknak a gyógynövények kiválasztásának és kutatásának indokait ., Ez a tanulmány a Verbena sp antiprotozoális aktivitásáról szóló első jelentést írja le. és C. xanthoarpa. Ezenkívül a Verbenaceae és a Myrtaceae család más fajait is tesztelték a T. vaginalis ellen, azonban sikertelenül . Számos biodiverzitás és a különböző populációk hagyományos ismerete vezetett tanulmányokat az új prototípusok felkutatására anti-T. vaginalis. A közelmúltban beszámoltak a Caatinga-ból hagyományosan a T. vaginalis ellen használt növények potenciáljáról . Calzada et al., bizonyította, hogy a mexikói hagyományos orvoslásban az urogenitális traktus rendellenességeire használt növények hatást mutattak ezzel a protozoánnal szemben. A dél-afrikai nemi betegségek ellen használt Amaryllidaceae Fajok ígéretes aktivitást mutattak a T. vaginalis ellen is .
figyelembe véve a trichomonosis közegészségügyi hatását és a rezisztens T. vaginalis izolátumok növekvő számát, alternatívákra van szükség a fertőzés kezelésére. A természetes termékek az aktív molekulák ígéretes forrása, az etnofarmakológiai megközelítés pedig megmenti a gyógynövények populációjának tudását., Ez a bölcsesség kémiai és farmakológiai vizsgálatokkal kombinálva értékes értéket képvisel az újítások, biztonságos és hozzáférhető gyógyszerek bioprospekciójában. Ez az úttörő tanulmány releváns eredményeket mutatott a Verbena sp anti-T. vaginalis aktivitásáról. és C. xanthoarpa, növények hagyományosan használt bennszülött lakosság Mbyá-Guarani fertőző betegségek. Annak ellenére, hogy erős anti-T. vaginalis aktivitást mutatott, ez a jelentés megmentette az őslakosok tudását, elkerülve ennek a bölcsességnek a vetélését.,
A szerzők hozzájárulása
Clara Lia Costa Brandelli és Patrícia de Brum Vieira egyaránt hozzájárult ehhez a munkához.
ezt a munkát a CAPES and FAPERGS Nanobiotec-Brazil programja támogatta. A szerzők köszönetet mondanak José Cirilo Pires Morinico (Mbyá-Guarani törzsfőnök) vezetőnek azért, hogy lehetővé tették e tanulmány megvalósítását és az értékes információkat. Alexandre José Macedo és Tiana Tasca megköszönte a CNPq-nak a kutatói ösztöndíjakat.
Vélemény, hozzászólás?