Abstrakt
Trichomonas vaginalis, mrskat prvoky, je původcem trichomonosis, nejčastější nonviral sexuálně přenosných onemocnění na celém světě. Vzhledem ke zvýšené prevalenci izolátů rezistentních na metronidazol jsou pro úspěšnou léčbu nezbytné alternativní léky. Přírodní produkty jsou zdrojem většiny nových léků a populární moudrost o používání léčivých rostlin je v tomto hledání mocným nástrojem., V této studii byla aktivita 10 léčivých rostlin široce používaných v každodenním životě domorodou skupinou Mbyá-Guarani hodnocena proti sedmi různým izolátům T. vaginalis. Mezi testovanými vodnými extrakty patří Verbena sp. (Guachu ka ‚ v Mbyá-Guarani jazyk) a Campomanesia xanthocarpa (Guavira v Mbyá-Guarani jazyk) ukázaly, že nejvyšší aktivitu proti T. vaginalis s MIKROFONEM hodnotu 4,0 mg/mL dosažení 100% účinnosti proti parazitům. Testy kinetického růstu ukázaly, že extrakty podporovaly úplné zrušení růstu po 4 h inkubace., Kromě toho testované extrakty nepodporovaly významnou hemolytickou aktivitu proti lidským erytrocytům. Naše výsledky poprvé ukazují potenciální aktivitu verbeny sp. a C. xanthocarpa proti T. vaginalis. Tato studie navíc ukazuje, že domorodé znalosti jsou důležitým zdrojem nových prototypových antiprotozoálních činidel.
1. Úvod
Trichomonas vaginalis parazituje lidského urogenitálního traktu způsobuje trichomonosis, nejčastější nevirové sexuálně přenosné onemocnění na světě, je zodpovědný za 248 milionů nových případů ročně ., Po kolonizaci parazit způsobuje vaginitidu, uretritidu a prostatitidu . Kromě toho byl patogen spojen s vážnými následky, jako jsou nepříznivé výsledky těhotenství a předčasný porod , neplodnost , predispozice k rakovině děložního čípku a zánětlivé onemocnění pánve . Důležité je, že trichomonóza působí jako kofaktor přenosu a získávání viru lidské imunodeficience (HIV). Navzdory dopadu této infekce je terapeutický arzenál omezující a pouze metronidazol a tinidazol, oba léky 5-nitroimidazol, jsou schváleny FDA pro léčbu trichomonózy ., Přestože je míra vyléčení vysoká, lze pozorovat selhání léčby a rezistence izolátů T. vaginalis je hlavním důvodem selhání léčby . V tomto smyslu je nepochybně třeba, že vyšetřování pro nové alternativy pro léčbu trichomonosis a dvě strategie mohou být následující: (i) hledat nové terapeutické cíle, které je nezbytné pro racionální vývoj nových antiparazitární látky a (ii) šetření nový anti-T., vaginalis sloučeniny strukturně odlišné od 5-nitroimidazolů a, v důsledku toho, působí jiným mechanismem, jak dokládá naše skupina .
v této souvislosti jsou přírodní produkty, zejména léčivé rostliny, nezměrné jako silný zdroj bioaktivních molekul. Od dávných dob, lidé používají rostliny k léčbě běžných infekčních onemocnění, a některé z těchto tradičních léků jsou stále integrován jako součást léčby různých chorob . Hledání založené na etnofarmakologických informacích navíc zachraňuje obrovské empirické znalosti využití rostlin ., V této souvislosti, pokud jde o přírodní prostředí a obrovské množství genetických zdrojů, Brazílie je zemí s velkým zájmem o etnofarmakologii .
domorodí lidé mají bohaté informace o biologické rozmanitosti a vědí, jak zachytit a využívat přírodní zdroje . Navzdory skutečnosti, že několik léků byly objeveny prostřednictvím tradičních léků a lidových znalostí, v Brazílii je 122 původních etnických skupin, ale jen 30% z nich byly zkoumány s ohledem na ethnobotanical aspekty ., Proto je studium rostlin používaných domorodou medicínou důležité pro propojení tradiční medicíny a biotického prostředí při zachování původních starověkých znalostí.
parazitické prvoky zůstávají hlavní hrozbou pro zdraví lidí a zvířat a existuje jen málo účinných léků pro léčbu mnoha prvočíselných onemocnění. S přihlédnutím k původní ethnopharmacology jako přispěvatel do systematického screeningu rostlin s antiprotozoální aktivitu, tato studie hodnotila anti-T., vaginalis aktivita nejdůležitějších léčivých rostlin používaných v původní medicíně Mbyá-Guarani, která se nachází na jihu Brazílie.
2. Materiály a metody
2.1. Podmínky kultury parazitů
v této studii sedm izolátů T., vaginalis byly použity: 30236 30238 a z American Type Culture Collection (ATCC), TV-LACM1, TV-LACM2 a TV-LACM3 (čerstvé klinických izolátech získaných od pacientek); TV-LACH1 a TV-LACH2 (čerstvé klinických izolátů od pacientů mužského pohlaví) to vše z Laboratório de Análises Clínicas e Toxicológicas, Ff de Farmácia, UFRGS, Brazílie (projekt s etické schválení UFRGS Etického Výboru pro Výzkum, počet 18923). Trichomonád byly axenically kultivovány v tryptikázo-kvasničný extrakt-maltóza (GOOGLE+) střední (pH 6.0), doplněném 10% tepelně inaktivovaného hovězího séra a inkubovány při 37°C .
2.2., Rostlinný Materiál
Rostlinného materiálu bylo odebráno z původní kmen Mbyá-Guarani nachází v Lomba dělat Pinheiro, Porto Alegre, RS, Brazil (30°06’47.62″ S a 51°07’37.85″ W), v Březnu 2011. Tato vesnice je denominována Tekoá Anhetenguá (v angličtině, True Village) a 200 lidí žije v oblasti shromážděné u 40 rodin. Ženy v obci mají znalosti o léčivých rostlinách používaných celou populací a prováděly sběr vzorků. Bylo shromážděno deset rostlin běžně používaných v domorodé medicíně pro infekční nemoci: listy aloe arborescens Mill., (ICN 173371), nadzemních částí Bidens pilosa L. (ICN 167397), nadzemních částí Rhipsalis baccifera (ICN 167402), kůry Luehea divaricata (ICN 167403), kořeny Trichilia sp. (ICN 173126), listy Campomanesia xanthocarpa o.Berg. (ICN 167401), listy Coix lacryma-jobi Lin. (ICN 167396), listy Citrus limonium (ICN 167399), listy Citrus reticulata (ICN 173127), a listy Verbeny sp. (ICN 167394). Vzorky poukázek byly uloženy v herbáři Federální univerzity do Rio Grande do Sul (ICN).
2.3., Příprava Rostlinných Extraktů,
čerstvé rostliny extrakty byly připraveny odpovídající tradiční užití domorodými lidmi tím, že odvar při 60°C po dobu 60 min . Vodné extrakty byly mrazem sušené, a pracovní roztok byl připraven na 8.0 mg/mL ultračisté vody, sterilizovány filtrací (0,22 µm) a uchováván při -20°C.
2.4. Anti-Trichomonas vaginalis test
deset vodných extraktů bylo in vitro vyšetřeno na aktivitu proti T. vaginalis. Test byl proveden v 96 mikrotitrových deskách při konečné koncentraci 4,0 mg / mL v jamkách., Na minimální inhibiční koncentrace (MIC) byla určena pomocí osmistupňové ředění (4.0–0.031 mg/mL), a životaschopnosti trofozoitů byla stanovena podle fluorimetrická metoda . Dvě kontroly byly provedeny: negativní kontrola pouze trofozoity a pozitivní kontrolu s 8.0 µM metronidazolu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA). Experimenty byly provedeny alespoň ve třech nezávislých experimentech, ve trojím vyhotovení. Výsledky byly vyjádřeny jako procento životaschopných trofozoitů ve srovnání s neošetřenými parazity.
2.5., Růstový účinek vodných extraktů
za účelem zkoumání účinku aktivních vodných extraktů na růst T. vaginalis byla provedena kinetická růstová křivka pomocí izolátu ATCC 30236. Počáteční hustota parazitů 2,0 × 105 trofozoitů / mL byla inkubována s extrakty v hodnotě MIC v TYMOVÉM médiu. Na trofozoity byly počítány pomocí hemocytometer během 72 h. Výsledky byly vyjádřeny jako trophozoite číslo (105/mL)., Pro mikroskopické analýzy, kontroly a ošetřeného parazitů byly odstředěny po dobu 10 min při 2000 ot / min se soustředit na organismy po 4 h inkubace, a příprava byla pozorována ve světelném mikroskopu (zvětšený ×1,000) trypanovou modré barvivo vyloučení.
2.6. Hemolytický test
tento test byl proveden podle metody používané Rocha et al. . Krevní skupina o pozitivní od zdravých lidských dobrovolníků byla odebrána s Alseverovým roztokem (1 : 1) a odstředěna při 2 000 ot / min po dobu 5 minut. Frakce erytrocytů byla třikrát promyta PBS 1x (pH 7.,0) a resuspendována tak, aby byla podána 1% suspenze červených krvinek (v/v). Koncentrace vodných extraktů byly zvoleny podle minimální inhibiční koncentrace (MIC) stanovené v testu citlivosti. Erytrocyty byly inkubovány s extrakty při 37 ° C za míchání po dobu 1 hodiny a poté byly odstředěny při 3000 ot / min po dobu 5 minut. Absorbance supernatantu byla měřena na 540 nm. Experiment byl proveden ve třech vyhotoveních, a procento hemolýzy, způsobené každého testovaného vzorku byla vypočtena ve srovnání se 100% hemolytická aktivita saponin z Quillaja saponaria .
3., Výsledky a Diskuse
Tato studie hodnotila anti-T. vaginalis aktivity vodných extraktů 10 léčivých rostlin používaných v medicíně systému Mbyá-Guarani. Důležité je, že mezi testovanými rostlinami jsme našli dva vodné extrakty se silnou aktivitou Anti-T. vaginalis in vitro. Slibné extrakty jsou Verbena sp. a campomanesia xanthocarpa. Výpis z Verbena sp., při dávce 4, 0 mg/mL prokázala optimální aktivitu Anti-T. vaginalis vyvolávající úplnou cytotoxicitu (100% úmrtí parazitů) na všech odlišných izolátech trichomonád(Obrázek 1 (a))., Listy extrakt z Campomanesia xanthocarpa ve stejné koncentraci také ukázal velmi vysokou anti-T. vaginalis aktivity, snížení parazit životaschopnost až 96% (Obrázek 1(b)).
jiné vodné extrakty vykazovaly různé výsledky. Vodný extrakt získaný z Bidens pilosa zcela zrušil životaschopnost trophozoitů pouze izolátu 30236(Obrázek 1 c)). Extrakt z kůry Luehea divaricata vyvolal snížení životaschopnosti T. vaginalis odlišně v každém testovaném izolátu trichomonád(Obrázek 1 (d))., Listy Coix lacryma-jobi vyvolané, v průměru 75% snížení životaschopnosti na T. vaginalis izoláty; nicméně, pro TV-LACH2 izolovat, snížení bylo pouze 40% (viz Obrázek 1(e)). Čerstvé klinických izolátů od pacientů mužského pohlaví (TV-LACH1 a TV-LACH2) předložila vyšší citlivost než izoláty, získaných od pacientek (ATCC a čerstvé klinické), když kořen extrakt z Trichilia sp. byl testován (Obrázek 1 (f)). Extrakty listů z citrusového limonia snížily asi 40% životaschopnost izolátů(Obrázek 1 (g))., Výtažky z Aloe arborescens a Citrus reticulata snížil životaschopnost 50% nejméně u jednoho izolátu (Čísla 1(h) a 1(i)), zatímco Rhipsalis baccifera snížena pouze 30% životaschopnost 30236 a TV-LACM2 izolátů (Obr. 1(j)).
ve srovnání s ostatními extrakty jsou výtažky z verbeny sp. a C. xanthocarpa prokázala nejslibnější aktivitu proti T. vaginalis a minimální inhibiční koncentrace byla stanovena pro izolát 30236 (Tabulka 1).,
|
|||||||||||||||||||||
aby bylo možné vyšetřit účinek nejaktivnějšího extraktu na růst a životaschopnost parazitů, byla provedena kinetická růstová křivka. Kontrola vykazovala klasický růstový vrchol po 24 h inkubace; nicméně, organismy ošetřené výtažky verbeny sp. A C., xanthocarpa, po 4 h inkubace, vyvolal dokončení růstu zrušení (Obrázek 2) a ukázal charakteristické modré barvy trypanovou modré barvivo vyloučení s uvedením buněčné smrti (Obrázek 3).
Kinetické křivky růstu Trichomonas vaginalis 30236 izolovat po ošetření vodné výtažky z Verbeny sp. a campomanesia xanthocarpa při 4, 0 mg / ml. Růst trofozoitů byl extrakty zcela inhibován za 4 hodiny inkubace., Data represent means ± standard deviation of at least three experiments, all in triplicate.
(a) Control
(b) Verbena sp.
(c) Campomanesia xanthocarpa
(a) Control
(b) Verbena sp.,
(c) Campomanesia xanthocarpa
Mikroskopické analýzy parazitů morfologie ve světelném mikroskopu (zvětšený ×1,000) trypanovou modré barvivo vyloučení. a) kontrola; b)po 4 hodinách ošetření vodným extraktem verbeny sp.; c) po 4 hodinách léčby vodným extraktem Campomanesia xanthocarpa.
za účelem zkoumání možného účinku C. xanthocarpa a Verbena sp., extrakty na membráně parazitů a také předběžné údaje o cytotoxicitě proti savčím buňkám byla provedena hemolytická aktivita těchto extraktů. Verbena sp. a extrakty C. xanthocarpa byly testovány na hodnotách MIC a prokázaly 6, 5 a 7, 6% lýzu erytrocytů (Tabulka 1). Tyto výsledky prokázaly, že oba extrakty, na hodnoty MIC, ne podporovat značnou hemolytickou aktivitu, což naznačuje, že mechanismus účinku je zodpovědný za parazita životaschopnost snížení pravděpodobně nezahrnuje parazitární membrány narušení., Navíc a co je důležité, tato zjištění naznačují, že oba extrakty nejsou toxické pro savčí buňky, protože nebyly lyse lidské erytrocyty.
tato studie přispívá k záchraně domorodých znalostí o léčivých rostlinách. Původní Mbyá-Guarani používají verbenu sp. (Guachu ka ‚ a v jazyce Mbyá-Guarani), jako čaj, pro zmírnění příznaků infekčních onemocnění, jako je horečka. To je v souladu s literaturou, která se týká verbeny sp. infuze jako sedativní, analgetické až zánětlivé poruchy, popáleniny kůže, amenorea, deprese a žaludeční onemocnění ., Kromě toho má tento druh řadu chemických složek, jako jsou flavonoidy, iridoidní glykosidy, fenylpropanoidní glykosid, steroly, triterpeny a glykokonjugát a biologická aktivita jim může být částečně přičítána . Kromě toho tento kmen využívá listy C. xanthocarpa (Guavira v jazyce Mbyá-Guarani) k léčbě průjmu, bolesti žaludku a červů., Tato rostlina se tradičně používá v jižní Brazílii jako depurativní, antidiarrhoeic, čistící prostředek, a protirevmatické, a snížit hladinu cholesterolu v krvi , a tyto vlastnosti lze přičíst třísloviny, saponiny a flavonoidy (quercetin, myricetin, quercitrin a rutin), sloučeniny přítomné v listech C. xanthocarpa .
Na záchranu ethnopharmacology historické použití rostlin je rozpoznán jako cenný pro bioprospection, protože poskytují zdůvodnění pro výběr a výzkumu léčivých rostlin ., Tato studie popisuje první zprávu o antiprotozoální aktivitě verbeny sp. a C. xanthocarpa. Kromě toho byly jiné druhy čeledí Verbenaceae a Myrtaceae testovány na T. vaginalis, avšak bez úspěchu . Několik biodiverzit a tradiční znalosti různých populací vedly studie k hledání nových prototypů anti – T. vaginalis. Nedávno byl hlášen potenciál rostlin tradičně používaných z Caatinga proti T. vaginalis . Calzada et al., prokázalo se, že rostliny používané pro poruchy urogenitálního traktu v mexické tradiční medicíně vykazovaly účinek proti tomuto prvoku. Druhy Amaryllidaceae používané proti pohlavním chorobám v Jižní Africe také vykazovaly slibnou aktivitu proti T. vaginalis .
vzhledem k dopadu trichomonózy na veřejné zdraví a vznikajícímu počtu rezistentních izolátů T. vaginalis jsou nezbytné alternativy pro léčbu této infekce. Přírodní produkty jsou slibným zdrojem aktivních molekul a přístup etnofarmakologie zachraňuje znalosti populace léčivých rostlin., Tato moudrost v kombinaci s chemickými a farmakologickými studiemi představuje drahocennou hodnotu v bioprospekci inovátů, bezpečných a přístupných léků. Tento průkopník studie prokázala relevantní výsledky o anti-T. vaginalis činnost Verbena sp. a C. xanthocarpa, rostliny tradičně používané domorodým obyvatelstvem Mbyá-Guarani pro infekční nemoci. Navzdory tomu, že vykazuje silnou aktivitu proti T. vaginalis, tato zpráva zachránila znalosti domorodých lidí a vyhnula se potratu této moudrosti.,
příspěvek autorů
Clara Lia Costa Brandelli a Patrícia de Brum Vieira přispěly k této práci stejně.
tato práce byla podporována programem NANOBIOTEC-Brazil od CAPES a FAPERGS. Autoři děkují náčelníkovi José Cirilo Pires Morinico (kmen Mbyá-Guarani), za umožnění dokončení této studie a za cenné informace. Alexandre José Macedo a Tiana Tasca děkují CNPq za výzkumné stipendia.
Napsat komentář