v buňkách a v laboratoři se enzymy zvané ligázy používají ke spojení fragmentů DNA dohromady. Pouze fragmenty DNA, které mají odpovídající, doplňkové konce mohou být spojeny ligací.
jak ligázy fungují?
ligázy spojují fragmenty DNA dohromady katalyzováním tvorby vazeb mezi sousedními nukleotidy.,
Podvaz v buňkách
Buňky přirozeně provést podvaz během replikace DNA, když Okazaki fragmenty jsou spojeny dohromady. Buňky také používají ligaci k opravě DNA, která byla poškozena, buď normálním buněčným metabolismem, nebo faktory prostředí, jako je UV světlo nebo záření. V DNA jedné lidské buňky se může každý den objevit až 1 milion přestávek.,
ligace v laboratoři
aby se v laboratoři objevila dna ligace, musí reakční směs obsahovat: komplementární fragmenty DNA, ligasebuffer a zdroj energie. Energie pro tuto reakci obvykle pochází z chemické látky zvané ATP (adenosintrifosfát).
Získání fragmentů DNA
DNA je připravena pro ligaci tím, že je nakrájíme na fragmenty s restrikční enzymy. Každý restrikční enzym snižuje DNA v určitém místě a vytváří fragmenty, které mají buď „tupé“ nebo „lepivé“ konce.,
spojování fragmentů DNA
ligázy mohou spojit všechny fragmenty DNA s „tupými“ konci. Mohou také spojit fragmenty DNA s „lepivými“ konci, ale pouze pokud se nukleotidy na pramenech doplňují. Získat komplementární ‚sticky ends‘ fragmenty DNA, které mají být spojeny, musí být řez s stejné omezení enzymu.
Napsat komentář