ženské pacienta, 30 let, byl přijat v únoru 2017 na Oddělení a Kliniky Alergologie, Klinické Imunologie a Interního Onemocnění, protože opakující se alergické reakce po konzumaci různých potravin.
tyto reakce byly převážně dermální, ve formě kopřivky na celém těle., Příznaky recidivující, generalizované kopřivky byly zaznamenány po požití různých zvláště složitých pokrmů obsahujících mnoho různých složek. Pacient tyto příznaky spojil s konzumací papriky, klementinek, medu pohanky a červeného vína.
nejzávažnější alergická reakce v životě pacienta nastala po jídle mango ovoce. Během několika minut se u pacienta vyvinula generalizovaná kopřivka, následovaný otokem obličeje, silnou bolestí žaludku a vodnatým průjmem. Přivolali záchranáře. Pacientovi byl podáván adrenalin, steroidy a antihistaminika.,
podrobná anamnéza odhalila, že v předchozích 6 letech měl pacient příznaky sezónní rinitidy (slzení, svědění očních víček a vodnatý výtok z nosu).
pacient byl v té době také léčen levothyroxinem pro hypotyreózu. Rodinná anamnéza pacienta je spojena s alergickými onemocněními: matka pacienta je alergická na inhalační alergeny a její otec na Břízu a kočku.
v tomto složitém případě diagnóza vyžadovala širokou škálu diagnostických metod., Jako součást diagnostiky provádí v Oddělení a Kliniky Alergologie, Klinické Imunologie a Interního Onemocnění, pacientka měla kožní prick testy s řadou inhalační alergeny (Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus, tráva/obilovin, plevele, Aspergillus fumigatus, Cladosporium herbarum, kočičí srst, topol, líska, olše, bříza, pelyněk, ribwort jitrocel) a potravinové alergeny (vejce, kravské mléko, rajčata, kapr, banány, žitná mouka, pšeničná mouka, arašídy, lískových oříšků, vepřové, kuřecí maso, oranžový) od Allergopharma-Nexter Sp. z o. o. (s. r. o.,), stejně jako nativní kožní testy s čerstvými potravinami (pohankový med, paprika, mango, Clementin, mrkev, celer, arašídy, banán, hořčice, kurkuma, kmín, červené víno).,vel IgE specifické pro vybrané alergeny (pelyňku, pelyněk, tráva mix, pozdní trávy mix, celer, papriky, mrkev, mango, banán, broskev, jablko, arašídy, lískové ořechy, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, brzy stromy mix, pozdě stromy mix, bříza, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Alternaria tenius, bílkoviny kravského mléka, koření mix, hořčice) byly stanoveny s ImmunoCap (ThermoFisher Scientific, Uppsala, Švédsko) systém, pomocí Phadia100 zařízení podle pokynů výrobce (ImmunoCAP specifikace IgE, fluoroenzymeimmunoassay, 52-5291-CS/05).,
diagnostika byla rozšířena stanovením úrovně IgE specifické pro alergenové složky pomocí metody ImmunoCap ISAC.
každý z těchto testů má jinou specifičnost a citlivost a neméně důležitou dostupnost a náklady. Kožní prick testy jsou považovány za rychlou a levnou metodu s okamžitými výsledky. Bohužel jejich míra detekce v potravinové alergii je omezená. V nedávném článku Griffiths et al. míra detekce Pro SPTs (53%) a ISAC (59%) byla podobná, s vyšší mírou detekce pro testování Imunokapy (66%)., U pacientů s maticí alergie, testy na senzibilizaci na ořechy zaznamenal podobně, ale s větší citlivostí (71%) pro ImmunoCAP testy než SPT (53%) nebo ISAC (65%). Proto jsme v tomto případě rozšířili diagnózu na in vitro stanovení koncentrace alergenově specifického IgE. Zlatým standardem v diagnostice potravinové alergie je stále dvojitě slepá placebem kontrolovaná potravinová výzva. V tomto případě pacient nesouhlasil s provokačními výzvami.,
Kožní prick testy byly pozitivní na následující alergenové extrakty (dole průměr v mm): grass 7 mm; plevele: 8 mm; kočičí srst: 5 mm; pelyňku: 6 mm; ribwort jitrocel: 4 mm; celer: 2 mm; clementine: 2 mm (histamin 4 mm, negativní kontrola 0 mm, výsledek byl interpretován jako pozitivní v případě dolu průměru ≥ 3 mm). U jiných testovaných alergenových extraktů nebyla pozorována žádná kožní reakce. Celková hladina IgE byla 406,53 kU / L.
výsledky nativních testů byly pozitivní pro mango 5 mm, celer 3 mm.,
výsledky pro specifické hladiny IgE testované metodou ImmunoCap jsou uvedeny v tabulce 1. Zvýšené hladiny IgE (převyšující 0,35 kU/L) byly nalezeny proti pelyňku, pelyněk, tráva mix, pozdní trávy mix, celer, papriky, mrkev, mango, banán, broskev, jablko, arašídy.
Poté, co pacient byl propuštěn z nemocnice jsme obdrželi výsledky ImmunoCap ISAC testů (Tabulka 2)., Zvláště pozoruhodná byla vysoká úroveň IgE specifická pro umění v 1 (defensin) z mugwort a Phl p 1 od timothy. Je třeba zdůraznit, že v přípravku ImmunoCap ISAC nebyly žádné zvýšené hladiny IgE specifické pro složky potravinových alergenů. Je možné, že příznaky OAS u tohoto pacienta vyplynuly z křížové reaktivity s alergeny timothy a mugwort. Příznaky kopřivky mohou být také důsledkem citlivosti na jeden z výše uvedených potravinových alergenů., Jediná anafylaktická reakce v životě pacientů nastala po konzumaci manga a tato přecitlivělost byla ta, která, jak jsme se rozhodli, vyžadovala další diagnózu.
Tady to musí být jasně uvedeno, že ImmunoCap ISAC nebylo zřejmé, jestli v tom konkrétním případě pacienta, alergie na mango bylo výsledkem zkřížené alergie s Art v 1, nebo alergii na jiné molekuly, nezávislý z pelyňku. ImmunoCap ISAC nemá k dispozici žádné složky alergenů manga.
aby se to objasnilo, byl aplikován test inhibice ImmunoCap pomocí alergenového extraktu z čerstvého ovoce manga., Šetření bylo založeno na modelu SPHIA (Single Point Highest inhibice Achievable Assay) popsaném Bernardim et al. v roce 2011 .
metodika tohoto inhibičního testu je stále považována za experimentální, ačkoli podobné inhibiční testy byly dříve aplikovány několika autory. Například v naší výzkumné jednotce byl popsán případ pacienta alergického na slunečnicová semena, kde byl použit test inhibice ImmunoCap ISAC k prokázání křížové reaktivity. V testu inhibice Umění v 1, Art v. 3, a Jug r 3 byly inhibovány proteiny přítomné v slunečnicová semena, extrakt alergen .,
pro provedení testu inhibice bylo zralé mango ovoce zakoupeno v místním obchodě s potravinami nabízejícím eco food. Ovoce bylo umyté, oloupané a jáma byla odstraněna, aby se získala jedlá část. Extrakt z buničiny obsahující bílkoviny byl získán metodami popsanými dříve . Nakrájené ovoce bylo zmrazeno v kapalném dusíku a smícháno na hladkou buničinu. Dužnina byl pak smíchán s 1 M NaCl v poměru 2:1 (2:1, v/v) a ponechána při teplotě 2-8 °C po dobu 24 h. Po uplynutí této doby byla směs centrifugována při pokojové teplotě při 12000×g po dobu 60 min. Extrakt byl získán obsahující 2,35 mg/dL proteinu., V inhibičním testu byl získaný extrakt smíchán s krevním sérem pacienta v objemovém poměru 1: 1 a inkubován při 2-8 °C po dobu 24 hodin . Současně byl připraven slepý vzorek, aby se zohlednilo zředění séra. Za tímto účelem, pacient je krevní sérum se smíchá s 1 M NaCl (1:1, v/v) a poté inkubovány při teplotě 2-8 °C po dobu 24 h. Po této době, hladiny IgE specifické pro pelyňku, Umění v1, a mango byla stanovena na připravený materiál, a to jak inhibována a ředí, a poměr inhibice byla vypočítána.,
V inhibici testu jsme dosáhli následujících výsledků—základní úroveň pelyňku sIgE v séru pacienta byl 144.32 kU/L slepý vzorek, po zředění s 1 M NaCl 1:1, koncentrace sIgE byl 72.16 kU/L. Po inkubaci séru pacienta s mango extrakt alergen úrovni pelyňku IgE byla 48.81 kU/L. bylo tedy prokázáno, že mango alergen extrakt inhiboval vazbu pelyňku IgE tím, 32.38%.
výchozí hladina art v 1 sIgE v séru pacienta byla 99, 8 kU / L., V slepý vzorek, po zředění s 1 M NaCl 1:1, koncentrace sIgE byl 49.9 kU/L. Po inkubaci séru pacienta s mango extrakt alergen úroveň Umění v 1 IgE byla 35.2 kU/L. bylo tedy prokázáno, že mango alergen extrakt inhiboval vazbu IgE Umění v 1 o 29,5%. Na základě provedených diagnostických postupů bylo prokázáno, že příznaky přítomné u pacienta mohou být výsledkem křížové reakce mezi alergeny manga a Art v 1. Výsledky inhibičního testu jsou uvedeny na obr. 1.
Výsledky testu inhibice s mango extrakt
Vzhledem k tomu, že tato zkouška inhibice byla experimentální metody a dříve popsaný protokol byl upraven tak, aby doprovázet potřeby tohoto konkrétního případu, inhibice test podle jiného protokolu byla provedena s cílem poskytnout konečné potvrzení cross-alergie. Sérum pacienta bylo inkubováno s alergenovým extraktem z mangového ovoce pomocí matrice ImmunoCap., Imunokapa byla předmyta čtyřikrát: dvakrát s prací prací imunokapou a dvakrát s neutrálním pH fosfátovým pufrem. 50 µL testovaného séra bylo přidáno do ImmunoCap připraveni, že způsob, a inkubovány po dobu 1 h při pokojové teplotě a poté centrifugována při 1500×g po dobu 2 min. Získané sérum s deplecí protilátek a nativní sérum byly analyzovány na přítomnost složky alergenu Art v 1 metodou ImmunoCap.
výchozí hladina art v 1 sIgE u pacientů v séru byla 99, 8 kU / L., V tomto případě nebylo sérum pacienta zředěno, takže negativní kontrola nebyla nutná. Po inkubaci pacientova séra s ImmunoCAP mango matricí byla hladina Art v 1 IgE 56,5 kU / l. v důsledku toho bylo prokázáno, že ImmunoCAP mango matrix inhibuje vazbu Art v 1 IgE o 43,4%. Tyto výsledky jsou uvedeny na obr. 2.
Výsledky inhibice s mango alergenu na ImmunoCap matice
Napsat komentář