Uma paciente do sexo feminino, 30 anos de idade, foi admitido em fevereiro de 2017 para o Departamento de Clínica de Alergologia, Imunologia Clínica e Doenças Internas, devido a recorrentes reações alérgicas após o consumo de vários alimentos.estas reacções foram em grande parte dérmicas, sob a forma de urticária em todo o corpo., Sintomas de urticária recorrente e generalizada foram experimentados após a ingestão de vários pratos especialmente complexos contendo muitos ingredientes diferentes. O paciente associou esses sintomas ao consumo de pimentos, clementinas, mel de trigo mourisco e vinho tinto.a reacção alérgica mais grave na vida do doente ocorreu após a ingestão de frutos de Manga. Em vários minutos, o doente desenvolveu uma urticária generalizada, seguida de edema facial, forte dor de estômago e diarreia aquosa. Os paramédicos foram chamados. O paciente recebeu adrenalina, esteróides e anti-histamínicos.,uma história clínica detalhada revelou que nos 6 anos anteriores o doente tinha sintomas de rinite sazonal (lacrimação, comichão nas pálpebras e descarga nasal aquosa).
na altura, o doente estava também a ser tratado com levotiroxina para hipotiroidismo. A história familiar do paciente está repleta de doenças alérgicas: a mãe do paciente é alérgica a alergénios inalatórios, e seu pai a bétula e gato.neste caso complexo, o diagnóstico requer uma vasta gama de métodos de diagnóstico., Como parte do diagnóstico realizado no Departamento de Clínica de Alergologia, Imunologia Clínica e Doenças Internas, o paciente tinha a pele testes cutâneos com um conjunto de inhalatory alérgenos (Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus, grama/cereais, ervas daninhas, Aspergillus fumigatus, Cladosporium herbarum, pêlo de gato, álamo, aveleira, amieiro, bétula, mugwort, ribwort banana-da-terra) e alérgenos alimentares (ovo de galinha, a vaca o leite, o tomate, a carpa, a banana, a farinha de centeio, farinha de trigo, amendoim, avelã, carne de porco, carne de frango, laranja) Allergopharma-Nexter Sp. z o. o. (Ltd.,), bem como testes de pele nativos com alimentos frescos (mel de trigo mourisco, pimentos, manga, Clementina, cenoura, aipo, amendoins, banana, mostarda, açafrão, alcaravia, vinho tinto).,níveis de IgE específica para determinados alérgenos (mugwort, absinto, início de grama mistura, final de grama mistura, aipo, pimentão, cenoura, manga, banana, pêssego, maçã, amendoim, avelãs, Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, início de árvores mistura, do final árvores mistura, bétula, Cladosporium herbarum, Aspergillus fumigatus, Alternaria tenius, proteína do leite de vaca, o tempero, misture, mostarda) foram determinadas com o ImmunoCap (ThermoFisher Científica, Uppsala, Suécia) do sistema, usando o Phadia100 equipamento de acordo com as instruções do fabricante (ImmunoCAP específicos IgE, fluoroenzymeimmunoassay, 52-5291-PT/05).,
os diagnósticos foram expandidos através da determinação do nível de IgE específico para componentes alergénicos, utilizando o método ImmunoCap ISAC.cada um destes testes tem especificidade e sensibilidade diferentes e, não menos importante, disponibilidade e custo. Testes de picada de pele são considerados um método rápido, barato com resultados imediatos. Infelizmente, a sua taxa de detecção na alergia alimentar é limitada. In a recent article by Griffiths et al. as taxas de detecção para SPTs (53%) e ISAC (59%) foram semelhantes, com uma taxa de detecção mais elevada para testes de Imunocape (66%)., Em doentes com alergias a frutos de casca rija, os testes de sensibilização aos frutos de casca rija tiveram uma pontuação semelhante, mas com uma sensibilidade maior (71%) para os testes de Imunocape do que os TSC (53%) ou ISAC (65%). Por conseguinte, alargámos o diagnóstico neste caso à determinação in vitro da concentração de IgE específica de alergénios. O padrão-ouro no diagnóstico de alergia alimentar ainda é o duplo cego placebo controlado desafio alimentar. Neste caso, o paciente não consentiu com desafios provocatórios.,
a Pele testes cutâneos foram positivas para os seguintes extratos de alérgenos (pápula média do diâmetro em milímetros): grama 7 mm; ervas daninhas: 8 mm; pêlo de gato: 5 mm; mugwort: 6 mm; ribwort banana de 4 mm; aipo: 2 mm; clementine: 2 mm (histamina 4 mm, controlo negativo 0 mm, o resultado foi interpretada como positiva, no caso de uma pápula de diâmetro médio igual ou superior a 3 mm). Não se observou qualquer reacção cutânea relativamente a outros extractos alérgenos testados. O nível total de IgE foi de 406,53 kU/L.
os resultados dos testes nativos foram positivos para manga 5 mm, aipo 3 mm.,os resultados para níveis específicos de IgE testados pelo método ImmunoCap são apresentados no quadro 1. Níveis elevados de IgE (acima de 0,35 kU/l) foram encontrados contra mugwort, absinto, mistura precoce de grama, mistura tardia de grama, aipo, pimentos, cenoura, manga, banana, pêssego, maçã, amendoins.
Após o paciente recebeu alta do hospital, nós recebemos os resultados do ImmunoCap ISAC testes (Tabela 2)., Um alto nível de IgE específico para Art v 1 (defensin) de mugwort e Phl p 1 de timothy foi particularmente notável. Vale a pena salientar que não houve níveis elevados de IgE específicos aos componentes de alérgenos alimentares disponíveis no ImmunoCap ISAC. É possível que os sintomas de OAS neste doente tenham resultado de reactividade cruzada com alergénios do timothy e do mugwort. Os sintomas de urticária podem também resultar da sensibilidade a um dos alérgenos alimentares acima mencionados., A única reacção anafiláctica a vida dos doentes ocorreu após o consumo de manga, e esta hipersensibilidade foi aquela que, decidimos, exigiu um diagnóstico adicional.
Aqui ele precisa ser claramente que o ImmunoCap ISAC teste não indicar se, nesse caso particular, o paciente com alergia a mango foi resultado de um cross-alergia com Arte v 1, ou uma alergia à outra molécula, independente de mugwort. O ImmunoCap ISAC não tem componentes alérgenos de Manga disponíveis.para clarificar esta situação, foi então aplicado o teste de inibição do ImmunoCap, utilizando o extracto alergénico de frutos frescos de Manga., O inquérito baseou-se no modelo SPHIA (ensaio de inibição de Ponto Único mais elevado possível) descrito por Bernardi et al. em 2011 .
A metodologia deste ensaio de inibição ainda é considerada experimental, embora testes de inibição semelhantes tenham sido anteriormente aplicados por vários autores. Por exemplo, na nossa unidade de investigação foi descrito um caso de um doente alérgico à semente de girassol, onde foi utilizado o teste de inibição do Isac Imunocap para provar a reactividade cruzada. No ensaio de inibição Art v 1, Art v 3 e Jug r 3 foram inibidos pela proteína presente no extracto de alergénios de sementes de girassol .,para realizar o teste de inibição, foi comprado um fruto maduro de Manga numa mercearia local que oferecia alimentos ecológicos. O fruto foi lavado, descascado e o poço foi removido para obter a parte comestível. O extracto de pasta contendo proteínas foi obtido utilizando métodos descritos anteriormente . A fruta cortada foi congelada em azoto líquido e misturada com polpa lisa. A polpa foi então misturada com NaCl de 1 M na razão de 2: 1 (2:1, v/v) e deixada a 2-8 °C durante 24 h. Depois disso, a mistura foi centrifugada à temperatura ambiente a 12.000×g durante 60 minutos. O extracto foi obtido contendo 2, 35 mg/dL de proteína., No teste de inibição, o extracto obtido foi misturado com o soro sanguíneo do doente com uma relação de volume de 1:1 e incubado a 2-8 °C durante 24 horas . Foi preparada simultaneamente uma amostra Cega, A fim de ter em conta a diluição do soro. Para esse efeito, o soro sanguíneo do doente foi misturado com NaCl de 1 M (1:1, v/v) e, em seguida, incubado a 2-8 °C durante 24 h. Após esse período, o nível de IgE específico para mugwort, Art v1, e mango foi determinado no material preparado, inibido e diluído, e a razão de inibição foi calculada. ,
No teste de inibição obtivemos os seguintes resultados—o nível basal de mugwort sIgE no soro do doente foi 144.32 kU/L. No cego exemplo, após diluição com 1 M de NaCl, 1:1, a concentração de sIgE foi 72.16 kU/L. Após a incubação do soro do doente com uma manga de alérgenos extrair o nível de mugwort IgE foi 48.81 kU/L. era, assim, demonstrado que a manga alérgeno extrato inibiu a ligação de mugwort IgE por 32.38%.
O nível basal de RMA v 1 sIgE no soro do doente foi 99, 8 kU / L., Na amostra cega, depois de diluí-la com 1 m NaCl 1:1, a concentração de sIgE foi de 49,9 kU/L. após incubação do soro do paciente com o extrato de alergénio de manga, o nível de Art v 1 IgE foi de 35,2 kU/L. foi assim demonstrado que o extrato de alergénio de Manga inibiu a ligação da IgE Art V 1 em 29,5%. Com base nos procedimentos de diagnóstico realizados, foi demonstrado que os sintomas presentes no doente podem ser resultado de uma reacção cruzada entre alergénios de manga e Art v 1. Os resultados do teste de inibição são apresentados na Fig. 1.
os Resultados do teste de inibição com o extrato de manga
Devido ao fato de que este teste de inibição foi um método experimental e o anteriormente descrito protocolo foi modificado para acompanhar as necessidades deste caso específico, um teste de inibição de acordo com um protocolo diferente, foi realizada, a fim de proporcionar um final de confirmação da cruz-alergia. O soro do paciente foi incubado com o extracto alergénico de um fruto de Manga, usando a matriz de Imunocape., O ImmunoCap foi pré-lavado quatro vezes: duas vezes com o Wash worksolution ImmunoCap, e duas vezes com o neutral pH fosfato buffer. Adicionaram-se 50 µL de soro testado ao Imunocape assim preparado, incubando-o durante 1 h à temperatura ambiente e centrifugando-o a 1500×g durante 2 minutos. O soro obtido com depleção de anticorpos e o soro nativo foram analisados para detectar a presença do componente alergénico Art v 1, Utilizando o método ImmunoCap.
O nível basal de RMA v 1 sIgE no soro dos doentes foi 99, 8 kU / L., Neste caso, o soro do doente não foi diluído, pelo que não foi necessário um controlo negativo. Após incubação do soro do doente com matriz de Manga Imunocap, o nível de IgE Art v 1 foi de 56, 5 kU/L. como resultado, foi demonstrado que a matriz de Manga Imunocap inibiu a ligação da IgE Art v 1 em 43, 4%. Estes resultados são apresentados na Fig. 2.
Resultados da inibição com a manga de alergênicos no ImmunoCap matriz
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