추상
의 비교 연구 목적. 유육종증은 병인이 알려지지 않은 전신 육아 종성 질환입니다. 많은 임상 프리젠 테이션이보고되었으며 급성 질환은 아 급성 및 만성 질환과 구별 될 필요가 있습니다. 예측할 수 없는 임상 질병의 과정을 평가하는 임상의 유틸리티 biomarker 혈청 검출에 사르코이드증을 따릅니다. 방법., 혈청 농도의 chitotriosidase,에이스,KL-6,lysozyme 분석되었는 다른 방법에 의해서 인구의 74 유육종증 환자(46 에 스테로이드 치료에서 샘플링)정기적으로 모니터링에서 시에나 증 지역별 추천 센터에서의 그룹 컨트롤을 비교할 목적으로 그들의 기여하는 임상의 관리 사르코이드증 환자입니다. 결과., KL-6 농도가 크게 상승에서 유육종증 환자는 함께 폐 섬유하고 있었다 크게와 상관 DLco 및 소비자 물가 지수 점수를하는 동안,chitotriosidase 크게 높이는 환자에서 폐외 현지화. 303.5IU/ml 의 컷오프 값으로 KL-6 은 최상의 민감도(78%)를 보였으 나 키토 트리오시다 제는 바이오 마커 중에서 가장 좋은 특이성(85%)을보고했다. 결론. KL-6 은 유육종증 환자에서 섬유 낭성 폐 관여의 신뢰할 수있는 바이오 마커입니다., 중 바이오 마커,KL-6 을 보여 최고의 감성과 혈청 chitotriosidase 최고의 특이성에서도에 대한 환자의 만성 스테로이드 치료를고,보다 상관 관계를 폐외 현지화.
1. 소개
유육종증은 t 림프구 및 대 식세포 활성화 및 영향을받는 장기로의 이동과 관련된 전신 육아 종성 질환입니다. 사이의 상호 작용 항 및 APC 극화합 T 림프구 T helper1 형(Th1),선도의 형성에 사르코 이드 육아로 구성 T 세포의 식세포,그리고 상피와 거대한 세포입니다., 코스의 사르코이드증은 예측할 수 없:는 죄 사함이 발생하는 대부분의 경우는 동안,지속적인 육아 염증으로 이어질 수 있습 섬유성 폐 질환입니다. 특정한 생체와 함께 좋은 민감도와 특이성에 따라서 필요한 임상 결과 예측 및 가이드 임상 결정을 내린다.
인간 키토 트리오시다 제는 활성화 된 대 식세포 및 호중구에 의해 분비되는 바이오 마커이다. 그것의 생리학적인 역할이 명확하지 않더라도,키틴 및 키틴 유사 기질의 가수 분해 및 분해에 역할을 할 수있다., 활성 유육종증 환자의 혈청 및 BAL 에서 증가 된 농도의 키토 트리 오시 다제가보고되었다. 키토 트리오시다 제는 방사선 학적 단계와의 상관 관계를 나타낸다. 임상 경과,스테로이드 반응성 및 질병의 잠재적 재발을 예측할 수 있습니다. 그러나,키토 트리 오시 다제가 폐외 기관 침범을 가진 유육종증 환자의 관리에서 신뢰할 수 있는지 여부는 명확하지 않다.
안지오텐신 전환 효소(ACE)는 안지오텐신 I 를 안지오텐신 II 로 전환시키는 산성 당 단백질입니다., 그것은 폐 내피 세포,주로 활성화 된 폐포 대 식세포에 의해 생성됩니다. 유육종증 환자의 혈청 및 발에서 상승되며 그 농도는 방사선 학적 단계와 상관 관계가 있습니다. 그러나 진단 및 예후 도구로서의 유용성은 낮은 민감도와 특이성에 의해 제한됩니다. ACE 는 특정 육아 종성 장애(베릴륨 증 및 규폐증 포함),갑상선 기능 항진증,당뇨병 및 기타 질병에서 높아질 수 있습니다.
리소자임은 단핵구-대 식세포 시스템에 의해 생성되며 육아종 형성에 관여하는 상피 세포는이 효소를 방출 할 수 있습니다., 유육종증 환자는 발병시 리소자임의 농도가 증가한 것으로 나타났습니다. 리소자임은 진단 도구가 아닌 예후 지표로 더 많이 간주됩니다. 그것은 결핵 및 진폐증과 같은 폐 질환에서 상승되는 낮은 특이성을 가지고 있습니다.
Krebs von den Lungen-6(KL-6)은 aec 에서 유래 된 인간 고 분자량 MUC1mucin 단백질입니다. 그 혈청 농도는 특발성 폐 섬유증 및 유육종증을 비롯한 여러 ILDs 에서 상승합니다., 유육종증에서 KL-6 은 ACE 활동과 상관 관계가 있습니다:양성 폐 축적의 신티그라피 증거가있는 2 기 및 3 기 환자에서 주로 증가합니다. 유육종증에서 높은 수준의 혈청 KL-6 은 손상되거나 재생되는 제 2 형 pneumocytes 에서 유래 한 KL-6 의 생산을 반영합니다.
이 연구에서는 우리에 비해 혈청 수준의 다른 바이오마커에 동의 환자와 만성 증 봤을 위한 상관관계를 보시려 고기,임상 프레젠테이션 및 현지화.
2. 재료 및 방법
2.1., 연구
우리는 소급 등록 74 유육종증 환자(27 남성(36.5%),의 평균 나이 년)정기적으로 모니터링에서 시에나 지역별 추천센터한 사르코이드증 및 적절 하 게. 모든 환자는 국제 ATS/ERS/WASOG 기준에 따라 진단되었습니다. 모두 진단 후 2 년 이상 우리 센터에서 추적 관찰을 받았으며 지속적인 만성 질환을 보였습니다. 제외 기준에는 Lofgren 증후군 환자,급성 질환 발병,자발적 해결 또는 2 년 미만의 추적 관찰이 포함되었습니다.,
혈청 샘플링에서 수행 되었 등록:에서 같은 날,폐기능 검사(PFT)및 흉부 X-ray 으로,방사선의 준비에 따라 Scadding 기준,수행되었습니다. 방사선 분류 연결된 샘플 검출한 표준 방식에 따라 널리 기준:단계 0,normal;1 단계,양자 hilar adenopathy 지 않고 실질 참여;2 단계,양자 adenopathy 고 실질 침투;3 단계,실질 침투;및 4 단계,폐 섬유와 관련된 사르코이드증., 모든 환자는 폐 섬유증을 확인하기 위해 흉부(HRCT)의 고해상도 CT 스캔을 받았다. 모든 피험자는 지역 윤리위원회의 승인을 받아 연구에 정보에 입각 한 동의를했습니다. 을 찾기 위해 cut-off value 의 혈청 KL-6 에서 우리의 인구,우리는 수집된 혈청에서 샘플 25 는 건강한 지원자(6 은 남성,평균 연령 년),의 역사 없이 함께 호흡기 질환과 복용하지 않는 약
2.2., 폐기능검사
다음과 같은 폐기능 측정에 따라 수행되 ATS/ERS 표준 매개 변수를 사용하여 도둑 갈매기 몸을 다시 플레디스모그래프와 함께 수정을 위한 온도와 기압:강요 숨을 내쉬는 볼륨에 첫 번째(fev1 에),강제로 중요한 수용량(FVC)및 확산 폐 일산화탄소(DLCO). 모든 매개 변수는 예측 값의 백분율로 표현되었습니다.
2.3., 임상 형질
환자 분류에 기초하여 방사선 폐 참여와 사르코이드 버전에 따르면 최근의 유전자 형의 관계에서 증명서(GenPhenReSa),뿐만 아니라 합성 생수(소비자 물가 지수)점수입니다. 우리는 이전에 설명한 바와 같이 다음 공식에 따라 모든 환자에서 CPI 를 계산했습니다:91−(예측 DLCO)−(예측 FVC)+.,
폐외의 지역화 질환이었으로 평가 기관의 특정 진단으로 관련의 간,비장,뼈,골 수 extrathoracic 림프절하고 피부의 모든 생검을 입증하는 동안,심장 현지화되었으로 평가 MR imaging.
2.4. Chitotriosidase Assay
Chitotriosidase 활성은 22μm4-methylumbelliferyl β-D-N,N,N-triacetylchitotriosidase(Sigma Chemical Co.)구연산염-인산염 완충액에서 pH5.2;100μl 기질을 37°C 에서 1h 동안 배양하고 1.4ml0 으로 반응을 중단시켰다.,1M 글리신-NaOH 완충액,pH10.8. Perkinelmer Victor X4fluorimeter(여기 파장 365nm)로 450nm 에서 형광을 판독 하였다. 키토 트리오시다 제의 혈청 활성은 nmol/ml/h 로 발현되었다.정상 값은 우리의 이전 연구에 따라 계산되었다.
2.5. ACE Assay
ACE 활성은 혈청 내 ACE 활성의 결정을 위해 비색 측정법(Far srl,Verona,Italy)을 사용하여 측정되었다. ACE 농도의 정상 범위는 30-80IU/l 이었다.
2.6. 리소자임 분석법
2.7., Krebs von den Lungen-6Assay
혈청 KL-6 은 NANOPIA®KL-6 시약 assay(Sekisui Diagnostics,UK)에 의해 측정되었다. 의 원리를 분석 결과는 응집의 sialylated 탄수화물 항원에서 샘플을 KL-6 단일 클론항체를 통해 항원 항체 반응입니다. 흡광도의 변화는 혈청 KL-6 수준을 결정하기 위해 측정됩니다. KL-6 농도는 IU/ml 로 표현됩니다.
2.8. 통계 분석
데이터는 다음과 같이 표현되었다. 그룹 간의 비교는 중요성이 설정된 Mann-Whitney test 와 Kruskal-Wallis test 에 의해 수행되었습니다., 스피어맨 테스트는 변수 간의 상관 관계를 찾는 데 사용되었습니다. 통계 분석 및 ROC 곡선을 사용하여 수행되었습니다 Statistica v7.0 소프트웨어,그래픽 표현의 데이터를 사용하여 실시 GraphPad Prism4.0 소프트웨어입니다.
3. 결과
3.1. 임상,방사선 및 기능 매개 변수
인구통계학적 특성,폐기능 검 값,그리고 Scadding 방사선 단계의 인구는 보고에서 표 1. 예상대로,발병은 주로 5 년(년)에 발생했으며,결코 흡연하지 않은 여성에서 유행했습니다., 에 관하여 의료 기록,46 환자(62%17 일 남자)에 스테로이드 치료에서 시간의 혈청 샘플링,평균의 용량의 프레드니손. 이 중 하나를 제외하고는 모두 1 년 이상 경구 스테로이드를 복용하고있었습니다. 13 명의 환자(3 명의 남성)가 경구 스테로이드(메토트렉세이트와 12 명,아자 티오 프린과 1 명)와 함께 면역 억제제를 복용하고 있었다. 스테로이드가없는 하위 그룹(28 명의 환자,10 명의 남성)중 두 명의 환자 만이 유육종증에 대한 특정 치료법을 복용 한 적이 없었습니다.,
에서 우리의 인구,PFT 매개 변수가 정상 범위에서 상당한 변경 폐 볼륨:63 환자 관리를 수행할 수락가능한 기동에 대한 DLCO 는 약간,장애인 평균.
3.2. 바이오 마커
혈청 KL-6 농도의 비교는 모든 환자 및 건강한 지원자에서 계산되었다;ACE 및 리소자임은 모든 환자의 혈청에서 검출되었다. 여섯 가진 환자 chitotriosidase 활동을<10nmol/ml/h 있었다 의심하 CHIT1 다형성과 분석에서 제외됩니다.,
상당한 차이의 바이오 마커의 수준을 발견된 사료를 받는 스테로이드와 그 처리과 스테로이드 및 면역억제제 치료입니다.
KL-6 은 ACE(;),리소자임(;)및 키토 트리오시다 제 활성(;)과 유의 한 상관 관계가 있었다(그림 1).,
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.3. Organ Involvement and Phenotypes
The percentage of sarcoidosis patients showing extrapulmonary involvement was 43.2%., 가장 흔한 폐외 지방화는 피부(16 명,21.6%),비장(11 명,14.8%),간(5 명,6.7%)이었다. 적은 일반적인 현지화되었 눈(3 환자 4%의 경우)및 extrathoracic 림프절(3 환자 4%);CNS(2 환자 2.7%의 경우)및 심장,뼈 골수의 참여(1.3%의 경우). 폐외 관여가있는 유육종증 환자는 제한된 폐 질환이있는 사람들보다 키토 트리오시다 제 활성이 유의하게 높았다(;)(그림 3). 기관 국소화와 관련하여 다른 유의 한 차이는 관찰되지 않았다.,
과 관련하여 GenPhenReSa 고기,환자 복 참여()보 상당히 높은 chitotriosidase 활동보다는 그 안 심장-피부-중추 신경계(OCCC)(),musculoskeletal-피부(),고립 폐 관련()(,각각;)., 이 하위 집단에서 kl-6,ACE 및 리소자임 수준간에 통계적으로 유의 한 차이는 발견되지 않았다.
에 따르면 방사능 점수 환자 fibrotic 사르코이드증(4 단계)여 가장 높은 농도의 혈청 KL-6 에 비해 다른 방사능의 단계 질병()(그림 4).
4., 토론
많은 생체 제안되었습에 대한 사르코이드증,하지만 아무도 보이고 있 만족스러운 전조 값을 식별하기 위한 재발 아래에서 치료 또는 중요한 기관 현지화. 이 연구에서 우리는 다른 유육종증 바이오 마커를 비교했다. 우리가 선택한 만성 질병에 환자 치료에서 1 년 이상의 임상 및 인구 통계 학적 데이터와 호환되는 일반적인 기능의 유육종 보고서 문학. 우리는 바이오 마커 목록에 KL-6 을 포함 시켰는데,이 단백질은 IPF 에서 연구되었으며 유육종증에서의 역할에 대한 데이터는 거의 없습니다., KL-6 에 대한 우리의 관심은 심한 섬유 낭성 폐 침범과 빈약 한 생존과의보고 된 상관 관계와 관련이있었습니다. Chitotriosidase,에이스,그리고 lysozyme 을 보였다 낮은 보급에서 우리의 인구 이전보다 관찰 아마 때문에,대부분의 환자에 있던 오래-용어는 조직 처리를 가진 스테로이드 및 징후를 보이지 않았다의 활성 질환에서 시간의 혈청 샘플링입니다. 반대로,KL-6 은 303.5IU/ml 의 컷오프 값으로 우리 인구에서 좋은 민감도와 특이성을 보였다., 우리의 지식,이것은 첫 번째 연구를 조사하기 위해 특정 cut-off value KL-6 에서 만성 증대 그룹의 건강한 컨트롤;그러나 이지 않았습의 주요 목표는 연구와 데이터의 유효성을 검사해야에서 폭 넓은 집단의 환자입니다. 우리의 연구 결과는 Miyoshi et al.에 의해 이미보고 된 ILD 유육종증 환자에서 섬유 낭성 폐 침범 및 기능 손상에 대한 KL-6 의 예측 가치를 확인했다., 그러나 우리의 연구는 먼저 보여주는 중요한 사이의 상관 관계를 고 biomarker KL-6,폐 fibrotic 폐 참여를 유육종증 환자,정량화하여 소비자 물가 지수 인덱스입니다. 또한,이 발견은 더 확인하여 중요한 상호 관계 DLCO 백분율,유지의 잠재적인 유틸리티 KL-6 측정을 평가하는 심각도 사르코이드증에 임상의 관리 이러한 환자입니다., 이러한 데이터를 일관에 관계없이 치료 상태,제안 만성 대식세포 활성화에 응답하지 않는 스테로이드 치료,특히 그 환자의 섬유성 폐 질환입니다. 의 유의 한 차이가 없다 KL-6expression 들 사이에서 발견 임상 고기 및/또는 폐외 현지화 나타내는 KL-6 려될 수 있는 신뢰할 수 있는 유일한 폐 관련 질병이 없어야 한다는 것입니다. 긍정적 상관관계가 있었 중 검출 증 바이오마커를 포함,에이스,lysozyme,chitotriosidase 및 KL-6 할 수 있는 그러므로 목록에 포함되어야의 전조 지표입니다.,
On the other hand,chitotriosidase 증명 보다 더 민감한 에이스,lysozyme 및 KL-6 도에서 환자에서 전신 트리트먼트 또한 것 같지만 biomarker 반영할 수 있는 extrathoracic 참여에 따라,최근 GenPhenReSa 임상 형로 분류하고 있습니다., 특히,그 표현이 더 발음을 가진 환자에 복부 장기 버전(간과 비장에서 우리의 인구는)아마 때문에 overexpression 에 의해 활성화된 상주 세포,이 데이터를 제 chitotriosidase 될 수 있의 신뢰할 수 있는 마커의 활성화 세망 내피 시스템에 사르코이드로 이전에는 환자에서 보고와 함께 lysosomal 저장 질환입니다. 비장 및 간 유육종증 국소화에서 키토 트리오시다 제 예후 가치에 대한 연구는 없으며 이는 본 연구의 관련 신규성이다., 달리 KL-6,chitotriosidase 활동하지 않는 것 같이 될 상관관계의 심각도에 따라 사르코 이드는 폐 참여하거나 기능 장애를 제안하는 다양한 패턴의 대식세포 활성화에 존재할 수있는 호흡 시스템의 유육종증 환자에 영향을 바이오 마커의’표현이다.
에서 결론적으로,환자 사르코이드증,중증 폐외 참여,또는 4 단계 섬유 손상을 나타내는 중요한 대상이 필요한의 식별을 신뢰할 수 있는 예후 바이오마커를 예측하는 질병이 재발하고 응답을 조직의 치료입니다.,
에 따라 이러한 결과,높은 수준의 chitotriosidase 및 KL-6 일(지 에이스하거나 lsysozyme)에서 관찰되었다 만성 유육종증 환자에 관계없이,치료입니다. 키토 트리오시다 제 활성은 다발성 장기 침범 환자에서 유의하게 높았으며,평가 다발성 유육종증에 대한 유망한 신뢰성을 나타냈다. 반대로,섬유 낭성 폐 침범,CPI 점수 및 감소 된 DLCO 백분율과 상관 관계가있는 KL-6 수준은 폐 유육종증의 중증도 마커로서의 잠재적 인 역할을 시사한다., 흥미롭게도,이러한 연구 결과보고되었다 인구의 만성 multiorgan 유육종증 환자들에서 치료,확장의 신뢰성 chitotriosidase 및 KL-6 에서도 설정할 수 있습니다.
데이터 가용성
데이터 집합이 생성되는 동안 그리고/또는 동안 분석은 현재의 학문에서 사용할 수 있는 해당 저자에 합리적인 요청입니다. 데이터에서 사용할 수 있 로라 Bergantini([email protected] 다)및 엘레나 Bargagli([email protected])에 대한 연구자의 기준을 충족에 대한 액세스를위한 기밀 데이터입니다.,
이해 상충
저자는 이해 상충이 없다고 선언합니다.
저자의 공헌
Laura Bergantini 와 Francesco Bianchi 는 똑같이 연구에 기여했습니다.
인정
현재 작업은 시에나 대학에서 수행되었습니다.피>
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