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Natalizumab,항체 치료에 사용 되돌아가 다발성 경화증(MS),을 방지하는 인신매매의 활성화 림프구,등 autoreactive 림프구,혈액을 통해 뇌(BBB). 주요 부정적 효과의 natalizumab 진보적인 다 초점 백색질 뇌증(X),파괴성 탈수 초성 질병에 의한 복제를 인 JC polyomavirus(JCV)에 희소 돌기 아교와 이다(1,2)., 혈액에서 중추 신경계(CNS)로의 이펙터 T 세포 인신 매매의 Natalizumab 억제는 국소 JCV 복제를 선호 할 수 있습니다(3-7).

여기에서,우리는 밤새 항원 활성화 ex vivo 후 MS 환자의 혈액에서 JCV 특이 적 이펙터 기억 t 세포(TEM)의 존재를 조사했다. 생체 내에서,특정 TEM 번호 감소되면 동족 antigen 취소(8-10),그들의 존재에 따라서도 포인트를 진행하는 JCV 복제입니다. Tem 은 항원에 재발 명될 때 감마 인터페론(ifn-γ)과 같은 사이토 카인을 빠르게 방출한다., 이전의 효소 연결 면역 흡착제 스팟 분석법(ELISPOT)은 최대 14 일 동안 JCV 펩타이드로 장기간 활성화 된 다음 T 세포에서 IFN-γ 발현을 조사했다(11). 그러나,장기간의 활성화할 수 있는 장기 대기 전류 T-cell 메모리를 다시 활성화되고 확장하는 것을 의미하는 긍정적인 반응하지 않는 것을 의미한 지속적인 면역 반응이다. 여기,우리는 먼저 PML 을 개발 한 두 명의 MS 환자에서 JCV 특이 적 TEM 의 존재를 조사했다. 첫 번째 환자는 natalizumab(39 회 주입)(신경학과,Pitié-Salpétrière Hospital)에서 39 개월 후 pml 로 진단 받았다., 그녀는 39 세 였고 natalizumab 이전에 10 년 동안 재발 재발의 병력이 있었으며 cyclophosphamide 와 mitoxantrone 을 받았다. PML 은 뇌척수액(CSF)에서 MRI 와 JCV PCR 에 의해 확인되었다. PML 증상 발병 8 주 후 JCV 특이 적 TEM 에 대해 테스트했을 때 CSF ml 당 1,040 개의 JCV 게놈 카피를 가졌습니다(JCV Q-PCR Alert kit;Nanogen Advanced Diagnostics). 그녀의 주변 혈액 단 cells(PBMC)에 활성화되었던 생체외에서 목표-V 및 Albumax 매체(Invitrogen)16 서 순화 JCV(변형 MAD-4;LGC Promochem;104.5 50%조직 문화를 전염하는 복용량/0.2ml)., 재조합 인터루킨 2(IL-2)는 첨가되지 않았다. 5,534PFU 에 상응하는 바이러스의 양이 각각의 웰에 첨가되었다. 이것은 0.02 의 감염(MOI)의 다중성에 대응했다. 그런 다음 세포를 유동 세포 계측법에 의해 세포 내 IFN-γ 에 대해 시험 하였다. 하룻밤 활성화에 따른 세포 사망률은 5%미만이었다. 도에 도시 된 바와 같이. 1A 및 andB,B,응답 세포에서 발견 되었 모두 CD4and CD8T-cell 하위 집합,그리고 그들의 대부분했다 CCR7−CD45RA−형의 특성을 이펙터는 메모리(12)., Anti-JCV TEM 한 감 IFN-γ ELISPOT(캡처하고 탐지 항체,복제 1-D1 및 K7-B6-1,각각;Mabtech)다음과 같은 16 서의 활성화와 함께 정제 JCV 또는 VP-1 펩티드(의 혼합 14 수영장의 겹치는 15-아미노-산 펩티드 전체를 덮는 JCV VP-1 단백질)(Fig. 1 기음). 두 번째 환자는 46 살고 있었다 11 년 역사의 재발-송 양 전 natalizumab,받은 그녀는 베타 인터페론,glatiramer 아세테이트,azathioprine,그리고 미 톡산 트론. 그녀는 24 번의 나탈리 주맙 주입 후 재평가를 위해 테논 병원 MS 센터에 회부되었습니다., 2012 년 5 월에 시행 된 뇌 MRI 는 병치 오른쪽 전두엽 부위에서 작고 선형의 T2-hyperintense 용의자 병변을 감지했습니다. 첫 번째 CSF 샘플은 JCV 에 대해 음성이었습니다. Natalizumab 철수 후 MRI 를 반복하면 병변 크기의 증가가 나타 났으며 두 가지 추가 CSF 검사로 이어졌으며 둘 다 JCV 에 대해 음성이었습니다. 혈장상의 JCV PCR 은 PML 발병 2 개월 및 4 개월 후에 수행되었다. 두 혈장 샘플 모두 음성이었다. 2012 년 9 월에 수행 된 뇌 생검은 마침내 PML 의 진단을 확인했습니다.,

ELISPOT 분석 IFN-γ 응답 JCV,수행 후 2 일의 마지막 natalizumab 주입,보의 존재 JCV-특정 TEM 에서 혈액(Fig. 1 기음). 흥미롭게도,순환 JCV-특정 TEM 숫자보다 낮았다에서 첫 번째 PML 환자가,누가 있을지도 모르고 높은 수준의 JCV 복제 뇌 JCV PCR 에 CSF 었다는 긍정적인에서 첫 번째 환자와 부정적인에서 두 번째입니다.,

우리는 또한의 존재를 검사합 JCV-특정 TEM 여 ELISPOT 의 시리즈에서 62MS 환자 돌아가는 송금 MS 으로 처리 natalizumab 에 따라 유럽 마케팅 관점뿐만 아니라,35MS 환자를 받지 않은 어떤 질병 수정 치료,그리고 그룹의 40 건강한 기부자에 대한 일치하는 나이와 성 MS 환자입니다. MS 환자의 특성은 표 1 에 나와 있습니다. 환자와 건강한 기증자는 파리 Pitié-Salpêtrière Hospital 의 윤리위원회의 승인을 얻은 연구에 참여하기 위해 서면 동의서를 제공했습니다., 는 ELISPOT 반응으로 간주되었 긍정적인 경우에는 정정 번호의 반점(명소의 번호를 활성화에 우물이 마이너스 수점에 치료되지 않는 우물)이 적어도 10 10 점에 치료되지 않는다.

양성 샘플의 비율은 건강한 기증자에서 2.5%였다(도 1). 2A). MS 그룹에서 양성 환자의 비율은 natalizumab 에 대한 시간과 함께 상승했다(그림 1). 2B 및 andC),C),에서 8.8%에서 치료되지 않는 환자들을 15.9%사이에 환자 치료 natalizumab 보다 적은 24 개월 27%사이에 환자 치료에 대한 더 많은 24 개월(Fig., 2C)(치료받지 않은 MS 및 대조군 대 24 개월 이상 치료받은 환자에게 유의미 함). JCV TEM 반응의 검출 빈도의 증가는 연장 된 natalizumab 치료가 JCV 재 활성화를 선호 함을 시사했다.

natalizumab 치료 환자의 하위 집합은 적어도 두 번 샘플링되었습니다(표 1 참조). 도에 도시 된 바와 같이. 2D,이 환자의 대부분은 샘플링 기간 동안 양성이되었거나 유지되었습니다.,이것은 신장의 주요 저장고입니다. 일반 인구의 상당 부분이 소변에서 바이러스를 배설하지만 혈액에서 JCV 의 증거는 없습니다(13-15). 또한,뇌에서 JCV DNA 의 존재는 신장에서의 존재와 독립적 인 것으로 보인다(16). 도에 도시 된 바와 같이. 2e,혈액에서 검출 가능한 JCV TEM 을 가진 MS 환자의 60%는 소변에서 검출 가능한 JCV 가 없었으며 소변에서 양성 JCV PCR 을 가진 환자의 69%는 검출 가능한 JCV TEM 이 없었다. 검출 가능한 JCV TEM 이없는 JCV 요로 배설은 건강한 기증자에서도 관찰되었다(도 1). 2E)., 이것은 신장에서 JCV 복제의 존재가 반드시 혈액에서 검출 가능한 JCV TEM 으로 이어지지는 않는다는 것을 시사한다. 반대로,이것은 혈액에서 JCV TEM 검출이 진행중인 extrarenal JCV 복제를 반영 할 수있는 가능성을 제기합니다.

에서의 연구를 사용하여 소설 JCV 효소결합 면역 분석법(ELISA)방법(17)예상한,초기의 JCV MS 환자 치료 natalizumab 었 53.6%(17). Seropositivity 는 바이러스 재 활성화와 관련된 TEM 반응의 존재와 반드시 상관 관계가있는 것은 아닙니다., 수명이 긴 플라즈마 세포를 지속할 수 있습 골수에서 오랜 기간은,아마도 수십 년 동안을 유지하고,지속적인 serum antibody titers 없이 활성 병원체에 복제(18,19). 우리는 2 명의 PML 환자를 포함하여 jcv ELISPOT 에 의해 검사 된 우리의 natalizumab 처리 된 MS 환자 56 명을 테스트하기 위해 동일한 ELISA 방법을 사용했습니다. 도에 도시 된 바와 같이. 2 층에서는 53.6%의 환자가 혈청 양성이었고 16.1%는 ELISPOT 양성이었다. JCV-혈청 양성 환자의 27%는 혈액에서 검출 가능한 JCV TEM 을 가졌다. JCV ELISPOT 양성인 한 명의 환자 만이 혈청 음성이었다., Gorelik 등에 따르면. 이 연구에서,JCV 혈청 분석법의 위음성 비율은 2.5%(17)이다.

우리의 결과는 MS 환자에서 JCV TEM 반응의 검출 빈도가 natalizumab 에서의 시간에 따라 증가한다는 것을 보여줍니다. 이 연구는 또한 증가를 보였 T 세포의 반응을 JCV12 개월 후 natalizumab 치료,하지만 이 연구에 제한되었 18 개월 동안 치료의(20)는 반면,우리가 발견한 가장 강한 증가에 effector T 세포의 반응이 발생한 후 24 개월이다.,

따라서 우리의 결과는 외측 부위를 포함하여 natalizumab 치료 중 JCV 재 활성화를 가리 킵니다. JCV 는 PML 이없는 HIV-seronegative 개인의 뇌에서 검출되었습니다(21). 의 감소 CNS immunosurveillance 에 의해 유도 된 natalizumab 수 있습 호의 현지 바이러스 활성화할 수 있는 시작으로 증상이 간헐적으로 복제 바이러스지 진화할 수 있었으로 지속적인 바이러스의 복제 및 그 PML. 바이러스 활성화 활성화할 수 있습 특정 주변 T 림프구를 통해,antigen-presenting cells,같은 위치에 두뇌를 배출 자궁 경부 림프절(22-24)., 로 natalizumab 대상으 VLA-4receptor,이러한 특정한 세포할 수 없다 효율적으로 십자가의 뇌혈관 및 수 있습 따라서 축적에 혈액을 용이하게 감지합니다. PML 은 또한 후기 hiv 감염의 합병증입니다. JCV 특이 적 이펙터 CD4 및 CD8T 세포의 검출이 AIDS 관련 PML 보다 선행 할 수 있는지 여부는 추가 조사를받을 가치가있는 관심 지점입니다. 그러나 AIDS 관련 PML 은 natalizumab 유도 PML 과 분명히 다릅니다., PML 을 개발하는 대부분의 HIV 감염 환자는 심오한 CD4 림프구 감소증을 앓고 있으며,이는 CD4 도움 부족을 통해 CD8T 세포 기능을 변화시킵니다(25). 또한과는 달리,환자에 natalizumab 없 봉쇄 T 세포의 매매를 통해 뇌혈관 장벽이 있을 방지할 수 있습 JCV-특정 TEM 축적에서 혈액입니다.

함께,우리의 결과는 기능적인 분석 실험을 검출 가능 JCV-특정 TEM 응답이 도움이 될 수 있을 식별 환자 발병 위험 특성과 치료 기간 동안을 억제하는 항체 림프구 인신 매매를 통해 blood-brain barrier.,피>