추상
트리코모나스 vaginalis,a 편모 원생동물,의 원인이 되는 에이전트 trichomonosis,가장 일반적인 nonviral 성병 세계적입니다. 메트로니다졸 내성 분리 물의 증가 된 유병률을 고려하여 대체 약물은 성공적인 치료에 필수적입니다. 천연물은 대부분의 신약의 원천이며 약용 식물의 사용에 대한 대중적인 지혜는이 검색에서 강력한 도구입니다., 이 연구에서,활동의 10 약용 식물의 광범위하게 일상 생활에서 사용하여 Mbyá-과라니 원주민 그룹 평가에 대해 다 T.vaginalis 분리된다. 테스트 된 수성 추출물 중 Verbena sp. (Guachu ka’a 에 Mbyá-과라니어)고 Campomanesia xanthocarpa(Guavira 에 Mbyá-과라니어)여 가장 높은 활동에 대해 T.vaginalis 마이크 값 4.0mg/mL 도달하는 100%의 효능에 대한 기생충이다. 동역학 성장 분석 결과,추출물은 배양 4 시간 후에 완전한 성장 폐지를 촉진한다는 것을 보여 주었다., 또한,시험 된 추출물은 인간 적혈구에 대한 유의 한 용혈 활성을 촉진시키지 않았다. 우리의 결과는 Verbena sp 의 잠재적 인 활동을 처음으로 보여줍니다. 그리고 T.vaginalis 에 대한 C.xanthocarpa. 또한,이 연구는 토착 지식이 새로운 프로토 타입 항균제의 중요한 원천임을 보여줍니다.
1. 소개
트리코모나스 vaginalis parasitizes 는 비뇨생식기의 인간관을 일으키는 trichomonosis,가장 널리 퍼진 비 바이러스 성병 전 세계에 대한 책임있는 248 만 새로운 경우 매년 수 있습니다., 식민지화 후 기생충은 질염,요도염 및 전립선 염을 유발합니다. 또한,병원균과 관련되어 심각한 결과로 불리는 임신 결과 및 조산,불임,경향 자궁경부암,및 골반의 염증성 질환입니다. 중요하게도,트리코모나스 증은 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)전염 및 획득에서 보조 인자 역할을합니다. 에도 불구하고의 영향이 감염 치료 무기한,그리고만 메트로니다졸고증은 티니다졸,모두 5-nitroimidazole 약물,FDA 에 의해 찬성을 위한 trichomonosis 치료입니다., 치료율이 높지만 치료 실패가 관찰 될 수 있으며 T.vaginalis isolates 의 저항성이 치료 실패의 주된 이유입니다. 이러한 의미에서,그것은 의심 할 여지없이 필요한 조사를 위해 새로운 대안의 처리를 위해 trichomonosis 고 두 가지 전략을 따를 수 있습니다:(i)이 검색에 대한 새로운 치료 목표는 필수적으로 합리적인 개발의 새로운 기생충제하고(ii)의 조사는 새로운 반대로 T., vaginalis 화합물은 구조적으로 5-니트로 이미 다졸과 구별되며 결과적으로 우리 그룹에 의해 입증 된 바와 같이 다른 메커니즘에 의해 작용합니다.
이러한 맥락에서,천연 제품,특히 약용 식물,은 헤아릴 수 없는 강력한 출처의 생리 활성 분자. 고대부터 사람들은 식물을 사용하는 치료의 일반적인 전염병,그리고 몇 가지의 이러한 전통 의약품은 여전히 통합 된 일부분으로의 치료의 병리. 또한,민족 약리학 적 정보에 기초한 검색은 식물 이용에 대한 엄청난 경험적 지식을 구출한다., 이러한 맥락에서 자연 환경과 방대한 풍부한 유전 자원과 관련하여 브라질은 민족 약리학에 큰 관심이있는 나라입니다.
토착민들은 풍부한 생물 다양성 정보를 보유하고 있으며 천연 자원을 포착하고 사용하는 방법을 알고 있습니다. 사실에도 불구하고 여러 약물이 발견되었을 통해 전통적인 치료와 민속한 지식,브라질에 있는 122 민족하지만,30%들의 조사에 관한 민속식물 측면이 있습니다., 따라서,이 연구의 식물을 사용하여 토착 약은 중요한 인터커넥트 전통 의학 및 biotic 환경 보존 원주민 고대의 지식이다.
기생 원생동물에 남아 있는 주요 위협하는 인간 및 동물의 건강 상태,그리고 몇 가지 효과적 약물의 처리를 위해 많은 원생 동물 질병이 있습니다. Antiprotozoal 활성을 가진 식물의 체계적인 스크리닝에 기여자로서 토착 민족 약리학을 고려하여,이 연구는 항-T 를 평가했다., 브라질의 남쪽에 위치한 Mbyá-Guarani 원주민 의학에서 사용되는 가장 중요한 약용 식물의 vaginalis 활동.
2. 재료 및 방법
2.1. 기생충 배양 조건
본 연구에서,T 의 7 개의 분리 물., vaginalis 사용되었:30236 및 30238 에서 미국 Type Culture Collection(ATCC);TV LACM1,TV-LACM2 및 TV LACM3(신선한 임상 격리에서 여성 환자);TV LACH1 및 TV LACH2(신선한 임상 격리에서는 남성 환자)모두에서 Laboratório de Análises Clínicas e Toxicológicas,Faculdade de Farmácia,UFRGS,브라질(프로젝트와 윤리적 의 승인 UFRGS 윤리 연구 위원회,수 18923). 트리코모나드는 트립티카제-효모 추출물-말토오스(TYM)배지(pH6.0)에서 액세 닉으로 배양하고,10%열 불 활성화 소 혈청으로 보충하고 37°C 에서 배양 하였다.
2.2., 공장 물자
공장 자료 수집에서 원주민 부족 Mbyá-과라니에 위치한 Lomba 할 Pinheiro,포르토 알레그레,RS,브라질(30°06’47.62″S 및 51°07’37.85″W),in March2011. 이 마을은 Tekoá Anhetenguá(영어,True Village)로 표시되며 200 사람들이 40 가족에 모인 지역에 살고 있습니다. 마을의 여성들은 전체 인구가 사용하는 약용 식물에 대한 지식을 가지고 있으며 표본 수집을 실시했습니다. 전염병에 대한 토착 의학에서 일상적으로 사용 된 10 개의 식물이 수집되었습니다:알로에 수목 공장의 잎., (ICN173371),Bidens pilosa L. 의 공중 부분(ICN167397),Rhipsalis baccifera 의 공중 부분(ICN167402),Luehea divaricata 의 짖는 소리(ICN167403),Trichilia sp 의 뿌리. (ICN173126),Campomanesia xanthocarpa o.Berg 의 잎. (ICN167401),Coix lacryma-jobi Lin 의 잎. (ICN167396),시트러스 리모늄의 잎(ICN167399),시트러스 레티쿨라타의 잎(ICN173127),및 버베나 sp 의 잎. (ICN167394). 바우처 표본은 Universidade Federal do Rio Grande do Sul(ICN)의 식물 표본에 기탁되었습니다.
2.3., 준비물의 추출물
신선한 식물 추출물을 준비 따르는 전통적인 사용하여 원주민에 의해 달인 60°C 에서 60min. 수성 추출물 동결 건조,그리고 작업 솔루션에서 준비 8.0mg/mL 에서 초순수 물 소독,여과(0.22μm)및 저장 -20°C
2.4. Anti-Trichomonas vaginalis Assay
T.vaginalis 에 대한 활성을 위해 시험 관내에서 10 개의 수성 추출물을 스크리닝 하였다. 분석법은 우물에서 4.0mg/mL 의 최종 농도로 96 마이크로 티터 플레이트에서 수행되었다., 억제 최소 농도(MIC)를 사용하여 결정 배 희석(4.0–0.031mg/mL),그리고 생존의를 통해 결정에 따라 fluorimetric 방법입니다. 두 가지 대조군이 수행되었다:trophozoites 로만 음성 대조군과 8.0μm metronidazole 으로 양성 대조군(Sigma Chemical Co.,세인트 루이스,MO,미국). 실험은 적어도 3 개의 독립적 인 실험에서 3 중으로 수행되었다. 결과는 치료되지 않은 기생충에 비해 생존 가능한 트로포 조이 트의 백분율로 표현되었다.
2.5., 성장 효과의 수용액 추출물
를 조사하기 위해서는 효과의 활성 수용액 추출물이 T.vaginalis 성장,운동의 성장 곡선을 사용하여 수행되었 ATCC30236 격리입니다. 2.0×105trophozoites/mL 의 기생충 초기 밀도는 tym 배지에서 mic 값으로 추출물과 함께 배양되었다. 72 시간 동안 혈구계를 사용하여 트로포 조이트를 계수하였고,결과는 트로포 조이트 수(105/mL)로 표현되었다., 현미경 분석을 위한 컨트롤 및 기생충 처리 원심 분리하여 10 분에서 2,000rpm 집중합체 4 시간 후부화,그리고 제조에서 관찰되었 광학 현미경(확대된×1,000)의 trypan blue dye 제외할 수 있습니다.
2.6. 용혈 분석법
이 분석법은 Rocha 등이 사용한 방법에 따라 수행되었다. . 건강한 인간 지원자들로부터 양성인 혈액형 O 를 Alsever 의 용액(1:1)으로 수집하고 2,000rpm 에서 5 분 동안 원심 분리 하였다. 적혈구 분획을 PBS1x(pH7.,0)및 resuspended 는 1%적혈구 현탁액(v/v)을 수득 하였다. 수성 추출물 농도는 감수성 분석법에서 결정된 최소 억제 농도(MIC)에 따라 선택되었다. 적혈구를 1 시간 동안 교반하에 37℃에서 추출물과 함께 배양 한 다음 3,000rpm 에서 5 분 동안 원심 분리 하였다. 상청액의 흡광도는 540nm 에서 측정되었다. 실험에서 수행되었 세중,백분율의 용혈에 의해 발생하는 각 샘플을 테스트 계산 비교하여 100%의 용혈성 활동에서 사포닌 Quillaja 비누풀.
3., 결과 및 토론
이 연구는 평가 항 T.vaginalis 활동의 수성 추출물의 10 약용 식물학에서 사용되는 시스템 Mbyá-Guarani. 중요하게도,시험 된 식물 중에서,우리는 강력한 항-t.vaginalis in vitro 활성을 갖는 2 개의 수성 추출물을 발견했다. 유망한 추출물은 Verbena sp 입니다. 그리고 Campomanesia xanthocarpa. 버베나 sp 에서 추출. 에 4.0mg/mL,증명하는 최적의 반대로 T.vaginalis 활동을 유도하는 완전한 세포 독성(100%기생충의 죽음)모두에게 뚜렷한 trichomonads 격리된다(그림 1(a))., 나뭇잎추출물의 Campomanesia xanthocarpa 에서 동일한 농도로 또한 매우 높은 항 T.vaginalis 활동을 감소,기생충의 생존율 96%(그림 1(b)).
다른 수성 추출물은 다양한 결과를 나타냈다. Bidens pilosa 에서 얻은 수성 추출물은 30236 분리 물(그림 1(c))의 trophozoites 생존력만을 완전히 폐지했습니다. Luehea divaricata 의 barks 의 추출물은 시험 된 각 trichomonads 분리 물에서 t.vaginalis 생존력의 감소를 다르게 유도했다(그림 1(d))., 의 잎 Coix lacryma-을 짓는 작업이 한창이 유발,평균 75%의 생존 능력 감소에 T.vaginalis 분리한다;그러나,TV-LACH2 분리,감소했 40%(그림 1(e)). 신선한 임상 격리에서는 남성 환자(TV-LACH1 및 TV LACH2)제 높은 민감성보다 격리에서 여성 환자는(ATCC 고 신선한 임상)가 뿌리 추출물 Trichilia sp. 테스트되었습니다(그림 1(f)). 감귤류 리모 늄에서 잎의 추출물은 분리 물의 생존력을 약 40%감소시켰다(그림 1(g))., 추출물에 arborescens 와 감귤류 reticulata 감소한의 생존 50%의 하나 이상의 분리(그림 1(h)1(i)),동 Rhipsalis baccifera 감소는 30%의 생존 30236 및 TV LACM2 격리된다(그림 1(j)).
다른 추출물과 비교하여 Verbena sp 에서 추출한 것입니다. C.xanthocarpa 증명하는 가장 유망한 활동에 대해 T.vaginalis,그리고 최소한 금지 농도 결정에 대한 30236 분리(표 1).,
|
|||||||||||||||||||||
를 조사하기 위해서는 효과의 가장 활동 추출 기생충 성장과 생존 능력,활동적인 성장 곡선이 수행되었다. 대조군은 배양 24 시간 후에 고전적 성장 피크를 나타냈다;그러나,유기체는 버베나 sp 의 추출물로 처리 하였다. 및 C., xanthocarpa,후 4 서의 배양을 갖추고 완전한 성장을 폐지(그림 2)와 보여 특징은 파란 색깔에 의해 trypan blue dye 제외을 나타내는 세포의 죽음(그림 3).
키네틱 성장 곡선의 트리코모나스 vaginalis30236 격리 치료 후에는 수용성의 추출 버베나 sp. 및 4.0mg/mL 의 Campomanesia xanthocarpa. 배양 4 시간에 추출물에 의해 트로포 조이 트의 성장이 완전히 억제되었다., Data represent means ± standard deviation of at least three experiments, all in triplicate.
(a) Control
(b) Verbena sp.
(c) Campomanesia xanthocarpa
(a) Control
(b) Verbena sp.,
(c)Campomanesia xanthocarpa
미세한 분석 기생충의 형태에서 빛을 현미경(확대된×1,000)의 trypan blue dye 제외할 수 있습니다. (a)대조군;(b)버베나 sp 의 수성 추출물로 처리 4 시간 후.;(c)campomanesia xanthocarpa 의 수성 추출물로 치료 4 시간 후.
C.xanthocarpa 와 Verbena sp 의 가능한 효과를 조사하기 위해., 추출에 기생충을 막고 또한 예비 데이터에서 세포 독성에 대한 포유류 세포,용혈성 활동의 이러한 추출물를 실시하였습니다. 버베나 sp. 및 C.xanthocarpa 추출물을 MIC 값에서 시험하고 각각 6.5 및 7.6%적혈구 용해를 입증 하였다(표 1). 이러한 결과를 증명하는 것 모두를 추출,에서 마이크 값이지 않았고,홍보의 상당한 용혈성 활동을 나타내는 작용 메커니즘에 대한 책임 기생충의 생존 능력 감소 아마을 포함하지 않는 기생 막습니다., 또한,중요한 것은 이러한 결과는 모두를 추출하지 않은 독성을 포유류 세포 이후 그들은하지 않았 lyse 인간의 적혈구.
이 연구는 약용 식물에 대한 토착 지식을 구출하는 데 기여합니다. 원주민 Mbyá-Guarani 는 Verbena sp 를 사용합니다. (Mbyá-Guarani 언어의 Guachu ka’a),차와 같은 발열과 같은 전염병의 증상 완화를 위해. 이것은 Verbena sp 와 관련된 문헌의 합의에 있습니다. 염증성 질환,피부 화상,무월경,우울증 및 위 질환에 진정제,진통제로서의 주입., 또한,이 종의 다양한 화학 성분으로,플라보노이드,iridoid glycosides,phenylpropanoid 배당체,스테롤,트리테르펜 및 glycoconjugate,과 생물학적 활동할 수 있는 부분적으로 기인하는 그들. 또한,이 부족은 설사,복통 및 벌레 치료를 위해 C.xanthocarpa(Mbyá-Guarani 언어의 Guavira)의 잎을 사용합니다., 이 식물은 전통적으로 사용하에서 남쪽으로 브라질 정화하는,antidiarrhoeic,세제 및 antirheumatic,을 줄이기 위하여 혈중 콜레스테롤,그리고 이러한 특성에 기인할 수 있습니다 타닌,사포닌,그리고 플라보노이드(quercetin,되,quercitrin 및 루틴),화합물은 현재에서의 잎 C.xanthocarpa.
구조 ethnopharmacology 의 역사는 식물의 사용으로 인식하고 소중한 bioprospection 때문에,그들이 감당할 근거에 대한 선택과 연구의 약용 식물입니다., 이 연구는 Verbena sp 의 antiprotozoal 활성에 대한 첫 번째 보고서를 설명합니다. 및 C. 크 산토 카르 파. 또한 verbenaceae 와 Myrtaceae 가족의 다른 종은 t.vaginalis 에 대해 테스트되었지만 성공하지 못했습니다. 여러 생물 다양성과 다른 집단에 대한 전통적인 지식은 새로운 프로토 타입 anti-T.vaginalis 를 검색하기위한 연구를 유도했습니다. 최근에는 T.vaginalis 에 대해 Caatinga 에서 전통적으로 사용 된 식물의 잠재력이보고되었습니다. 칼자다 외., 멕시코 전통 의학에서 비뇨 생식기 질환에 사용 된 식물이이 원생 동물에 대한 효과를 보였음을 입증했습니다. 남아프리카의 성병에 대해 사용 된 Amaryllidaceae 종은 또한 T.vaginalis 에 대해 유망한 활동을 보였다.
미치는 영향을 고려하의 trichomonosis 공공 장소에서 건강 및 긴급수성 T.vaginalis 격리,그것은 필요한 대안의 처리를 위한 웹 페이지로 리디렉션합니다. 천연물은 활성 분자의 유망한 원천이며,민족 약리학 적 접근법은 약용 식물의 인구에 대한 지식을 구출합니다., 화학 및 약리학 적 연구와 결합 된이 지혜는 혁신적이고 안전하며 접근 가능한 약물의 생체 면적에 귀중한 가치를 제시합니다. 이 선구자 연구는 버베나 sp 의 항-T.vaginalis 활성에 대한 관련 결과를 보여 주었다. 및 C.xanthocarpa,전통적으로 원주민 인구 Mbyá-Guarani 가 전염병에 사용하는 식물. 에도 불구하고의를 보여주는 강한 반대로 T.vaginalis 활동,이 보고서는 구조의 지식을 토착인 사람들을 피하고,유산이 지혜입니다.,
저자의 공헌
Clara Lia Costa Brandelli 와 Patrícia de Brum Vieira 는이 작품에 동등하게 기여했습니다.
인정
이 작품은 CAPES 와 FAPERGS 의 NANOBIOTEC-Brazil 프로그램에 의해 지원되었습니다. 저자 감사 족장 조세 Cirilo Pires Morinico(부족 Mbyá-과라니어),을 만들기 위한 가능한 성취이 연구하고 가치있는 정보입니다. Alexandre José Macedo 와 Tiana Tasca 는 연구원 동호회에 CNPq 에게 감사드립니다.피>
답글 남기기