DNAライゲーション–Science Learning Hub

細胞や研究室では、リガーゼと呼ばれる酵素がDNAの断片を結合するために使用されます。一致する相補的末端を有するＤＮＡ断片のみが連結によって結合され得る。

リガーゼはどのように機能しますか？

リガーゼは、隣接するヌクレオチド間の結合の形成を触媒することによって、DNAの断片を一緒に結合する。,

細胞は、岡崎断片が結合されるDNA複製中に自然にライゲーションを行う。細胞はまた、正常な細胞代謝またはUV光または放射線などの環境要因のいずれかによって、損傷したDNAを修復するために結紮を使用する。毎日、単一のヒト細胞のDNAには最大1万回の休憩が発生する可能性があります。,

ラボでDNAライゲーションを行うには、反応混mixtureに相補的なDNA断片、ligasebuffer、およびエネルギー源が含まれている必要があります。この反応のためのエネルギーは、通常、ATP（アデノシン三リン酸）と呼ばれる化学物質から来ています。

DNAは、制限酵素で断片に切断されることによって連結のために調製される。各制限酵素は、特定の部位でDNAを切断し、”鈍い”または”粘着性の”末端を有する断片を作る。,

リガーゼは、”鈍い”末端を有する任意のDNA断片を結合することができる。それらはまた、鎖上のヌクレオチドが相補的である場合にのみ、”粘着性”末端を有するDNA断片に結合することができる。相補的な”粘着性のある末端”を得るためには、結合されるDNA断片を同じ制限酵素で切断しなければならない。