PMC (Suomi)

TEKSTI

Natalitsumabia, vasta-aine käytetään hoitoon aaltomainen multippeliskleroosi (MS), estää ihmiskaupan aktivoitu lymfosyyttien, mukaan lukien autoreactive lymfosyyttien kautta veri-aivoesteen (BBB). Tärkein haittavaikutus natalitsumabi on progressiivinen multifokaalinen leukoenkefalopatia (PML), tuhoisa demyelinoiva sairaus aiheuttama replikointi ihmisen JC-polyomavirus (JCV) vuonna oligodendrosyytti ja astrosyytit (1, 2)., Natalitsumabi esto efektori-T-solujen ihmiskaupan siirtyminen verestä keskushermostoon (CNS) voisi suosia paikallisia JCV-replikointi (3-7).

tässä tarkastelimme JCV-spesifisen efektorimuistin T-solujen (TEM) esiintymistä MS-potilaiden veressä yön yli-antigeeniaktivaation ex vivo jälkeen. In vivo, erityisiä TEM numerot lasku, kun sukulais-antigeeni on poistettu (8-10), ja niiden läsnäolo voi siten viitata käynnissä JCV-replikointi. TEM vapauttaa nopeasti sytokiineja, kuten gamma-interferonia (IFN-γ), kun se annetaan uudelleen antigeeniksi., Edellisen entsyymi-immunologinen paikan määritys (ELISPOT) tutki IFN-γ-ilmaisun T-solut seuraavat pitkän aikavälin aktivointi JCV-peptidejä jopa 14 päivää (11). Kuitenkin pitkäaikainen aktivointi mahdollistaa pitkän aikavälin uinuva T-solu muistia uudelleen ja laajentaa, mikä tarkoittaa, että myönteinen vastaus ei välttämättä merkitse sitä, jatkuva immuunivastetta. Tässä tarkastelimme ensin JCV-spesifisen TEM: n esiintymistä kahdella MS-potilaalla, joille kehittyi PML. Ensimmäinen potilas sai PML-diagnoosin 39 kuukauden kuluttua natalitsumabihoidosta (39 infuusiota) (neurologian laitos, Pitié-Salpétrièren Sairaala)., Hän oli 39-vuotias ja oli 10-vuotisen historian relapsoivan-remittoivan MS Ennen natalitsumabia, hän oli saanut syklofosfamidia ja mitoksantroni. PML vahvistettiin aivo-selkäydinnesteestä (CSF) tehdyllä magneettikuvauksella ja JCV PCR: llä. Kun testataan JCV-erityisiä TEM, 8 viikon jälkeen PML oire puhkeamista, hän oli 1,040 JCV genomin kopioita / ml CSF (JCV-Q-PCR-Hälytys kit; Nanogen Advanced Diagnostics). Hänen perifeerisen veren mononukleaarisissa soluissa (PBMC) oli aktivoitu in vitro-AIM-V ja Albumax medium (Invitrogen) 16 s puhdistetulla JCV (kanta MAD-4; LGC Promochem; 104.5 50% kudosviljelyn infektoiva annos /0,2 ml)., Rekombinanttia interleukiini 2: ta (IL-2) ei lisätty. Kuhunkin kaivoon lisättiin 5 534 PFU: ta vastaava määrä virusta. Tämä vastasi moninaista infektiota (moi) 0,02. Solunsisäiset IFN-γ-solut testattiin tämän jälkeen virtaussytometrialla. Solukuolleisuus yön yli-aktivaation jälkeen oli alle 5%. Kuten kuvassa. 1A ja andB,B, vastaa solujen havaittiin sekä CD4 ja CD8 T-solujen osajoukkoja, ja suurin osa heistä oli CCR7− CD45RA− fenotyypin ominaisuus muisti mikseri (12)., Anti-JCV-TEM oli myös havaita IFN-γ ELISPOT (kaapata ja havaitseminen vasta-aineita, klooneja 1-D1 ja K7-B6-1, vastaavasti; Mabtech) seuraavat 16 s aktivointi puhdistetulla JCV-tai VP-1 peptidejä (sekoitus 14-altaat päällekkäisiä 15-amino-happoa peptidejä, jotka kattavat koko JCV VP-1-proteiini ) (Fig. 1C). Toinen potilas oli 46-vuotias ja oli 11-vuotisen historian relapsoivan-remittoivan MS Ennen natalitsumabia, hän oli saanut interferoni beeta, glatirameeriasetaatti, atsatiopriini, ja mitoksantroni. Hänet toimitettiin Tenon Hospital MS center for reevaluationiin 24 natalitsumabi-infuusion jälkeen., Aivojen MRI suoritetaan Toukokuussa 2012 havaittu pieni, lineaarinen, T2-hyperintensiivistä epäilty vaurio juxtacortical oikea edestä alueella. Ensimmäinen CSF-näyte oli negatiivinen JCV: n osalta. Toista MRI jälkeen natalitsumabia peruuttaminen paljasti kasvua vaurion koko, mikä vielä kaksi CSF tutkimukset, jotka molemmat olivat negatiivisia JCV. JCV PCR plasmassa tehtiin 2 ja 4 kuukautta PML: n alkamisen jälkeen. Molemmat plasmanäytteet olivat negatiivisia. Syyskuussa 2012 tehty aivobiopsia vahvisti lopulta PML: n diagnoosin.,

ELISPOT analyysi IFN-γ-vaste, JCV, suoritetaan 2 päivää sen jälkeen, kun viimeinen natalitsumabia infuusio, osoitti läsnäolon JCV-erityisiä TEM veressä (Fig. 1C). Mielenkiintoista, kiertävä JCV-erityisiä TEM numerot olivat alhaisemmat kuin ensimmäisellä PML potilas, joka on saattanut olla korkeampi JCV-replikointi aivoissa, kuten JCV-PCR-CSF oli positiivinen ensimmäinen potilas ja negatiiviset toisella.,

– Meillä on myös tutkinut läsnäolo JCV-erityisiä TEM, joita ELISPOT sarjassa 62 MS-potilaiden relapsoivan-remittoivan MS-natalitsumabihoitoa mukaan Euroopan markkinoinnin kannalta, sekä 35 MS-potilailla, jotka eivät saaneet mitään taudin kulkuun vaikuttavaa hoitoa, ja ryhmä 40 terveillä luovuttajilla sovitettu iän ja sukupuolen kanssa MS-potilailla. MS-potilaiden ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. Potilaat ja terveet luovuttajat antoivat kirjallisen suostumuksensa tutkimukseen osallistumiseen, jonka pariisilaisen Pitié-Salpêtrièren sairaalan eettinen komitea hyväksyi., On ELISPOT vastaus oli positiivinen, jos korjattu useita paikkoja (useita paikkoja aktivoitu wells miinus määrä paikkoja hoitamatta wells) oli vähintään 10, jossa on vähemmän kuin 10 paikkoja hoitamatta wells.

positiivisten näytteiden osuus terveillä luovuttajilla oli 2,5% (Kuva. 2 A). Ms-ryhmässä positiivisten potilaiden osuus nousi natalitsumabia (Kuva. 2B ja jac),C), 8,8% hoitamattomien MS-potilailla 15,9% potilailla, natalitsumabihoitoa vähemmän kuin 24 kuukautta ja 27% potilailla, joita oli hoidettu yli 24 kuukautta (Fig., 2C) (merkitsevä yli 24 kuukautta hoidetuilla potilailla verrattuna hoitamattomaan MS-tautiin ja verrokkeihin). Tämä kasvu taajuus havaitseminen JCV TEM vastauksia ehdotti, että pitkäaikainen natalitsumabi-hoito suosi JCV-regenerointi.

natalitsumabia saaneista potilaista otettiin näytteitä vähintään kahdesti (KS.Taulukko 1). Kuten kuvassa. 2D, useimmat näistä potilaista joko tuli tai pysyi positiivisena näytteenottojakson aikana.,

munuainen on tärkeä säiliö JCV: lle. Merkittävä osa väestön erittää virusta virtsassa, mutta ei ole näyttöä siitä, JCV veressä (13-15). Lisäksi JCV-DNA: n esiintyminen aivoissa näyttää olevan riippumatonta sen esiintymisestä munuaisissa (16). Kuten kuvassa. 2E, 60% MS-potilaat, joilla on havaittavissa JCV TEM veressä ei ollut havaittavissa JCV virtsassa, ja 69% potilaista, joilla on positiivinen JCV-PCR virtsasta ei ollut havaittavissa JCV-TEM. JCV: n erittymistä virtsaan ilman havaittavaa JCV TEM: ää havaittiin myös terveillä luovuttajilla (Kuva. 2 E)., Tämä viittaa siihen, että JCV-replikaation esiintyminen munuaisissa ei välttämättä johda havaittavaan JCV-TEM: ään veressä. Toisaalta tämä nostaa esiin sen mahdollisuuden, että JCV TEM-tunnistus veressä voi heijastaa jatkuvaa ekstrarenaalista JCV-replikaatiota.

tutkimuksessa käyttämällä romaani JCV-entsyymi-immunologinen määritys (ELISA), menetelmä (17), arvioitu levinneisyys JCV-MS-potilaille annettiin natalitsumabia oli 53,6% (17). Seropositiivisuus ei välttämättä korreloi viruksen uudelleenaktivoitumiseen liittyvän TEM-vasteen kanssa., Pitkäikäinen plasman soluja voi kestää luuytimessä pitkään, ehkä vuosikymmeniä, ylläpitää kestävää seerumin vasta-ainepitoisuuksia ilman aktiivista taudinaiheuttaja replikointi (18, 19). Käytimme samaa ELISA-menetelmää testataksemme 56: ta natalitsumabia saaneista MS-potilaista, jotka JCV ELISPOT oli testannut, mukaan lukien 2 PML-potilasta. Kuten kuvassa. 2F, 53,6% potilaista oli seropositiivisia ja 16,1% ELISPOT-positiivisia. 27 prosentilla JCV-seropositiivisista potilaista oli havaittavissa oleva JCV TEM veressään. Vain yksi potilas, joka oli JCV ELISPOT-positiivinen, oli seronegatiivinen., Mukaan Gorelik et al., JCV-serologisen määrityksen vääränegatiivisuus on 2,5% (17).

tuloksemme osoittavat, että JCV TEM-vasteiden toteamistiheys MS-potilailla lisääntyy natalitsumabia käytettäessä. Edellinen tutkimus osoitti myös kasvua T-solujen vasteita JCV jälkeen 12 kuukautta natalitsumabi-hoidon, mutta tämä tutkimus oli rajattu 18 kuukauden hoidon jälkeen (20), kun taas huomasimme, että vahvin kasvu efektori-T-solujen vasteita tapahtui sen jälkeen, kun 24 kuukautta.,

tuloksemme viittaavat näin ollen JCV: n uudelleenaktivoitumiseen natalitsumabihoidon aikana, myös ekstrarenaalisissa kohdissa. JCV: tä on havaittu HIV-seronegatiivisten henkilöiden aivoissa ilman PML: ää (21). Vähentynyt CNS immunosurveillance aiheuttama natalitsumabi saattaa suosia paikallisia viruksen reaktivaatio, joka voi aloittaa mahdollisimman oireeton ajoittainen viruksen replikaatiota, mutta voisi kehittyä kohti kestävää viruksen replikaatiota ja sitten PML. Viruksen uudelleenaktivoituminen voi aktivoida perifeerisiä spesifisiä T-lymfosyyttejä antigeenia esittävien solujen kautta esimerkiksi aivoja tyhjentävissä kohdunkaulan imusolmukkeissa (22-24)., Kuten natalitsumabi tavoitteet VLA-4-reseptoria, nämä erityiset solut eivät pysty tehokkaasti läpäisemään veri-aivoesteen ja voi siten kertyä verta, mikä helpottaa niiden havaitsemista. PML on myös myöhäisvaiheen HIV-infektion komplikaatio. On kiinnostavaa, että JCV-spesifisten efektori CD4-ja CD8 T-solujen havaitseminen saattaa edeltää aidsiin liittyvää PML: ää. Aidsiin liittyvä PML eroaa kuitenkin selvästi natalitsumabin aiheuttamasta PML: stä., Useimmilla HIV-infektoituneilla potilailla, joille kehittyy PML, on syvä CD4-lymfopenia, joka myös muuttaa CD8 T-solujen toimivuutta CD4-avun puuttumisen vuoksi (25). Lisäksi, toisin kuin potilaiden natalitsumabia, ei ole saarto T-solu-kaupan kautta veri-aivoesteen, ja tämä voi estää JCV-erityisiä TEM kertyminen verta.

Yhdessä meidän tulokset viittaavat siihen, että toiminnalliset määritykset voidaan havaita JCV-erityisiä TEM vastauksia voisi auttaa tunnistamaan ne potilaat, joilla riski sairastua PML-hoidon aikana vasta-aineita, jotka estävät lymfosyyttien kaupan kautta veri-aivoesteen.,