Tiivistelmä
Trichomonas vaginalis, on flagellaattisienet alkueläin, on aiheuttava aine trichomonosis, yleisin nonviral sukupuolitauti maailmassa. Ottaen huomioon lisääntynyt esiintyvyys metronidatsoli-inhibiittoreille resistenttejä kantoja, vaihtoehtoiset lääkkeet ovat välttämättömiä onnistuneen hoidon. Luonnontuotteet ovat useimpien uusien lääkkeiden lähde, ja suosittu viisaus lääkekasvien käytöstä on tehokas työkalu tässä haussa., Tässä tutkimuksessa toiminnan 10 lääkekasveja käytetään laajasti jokapäiväisessä elämässä, jonka Mbyá-Guarani alkuperäiskansojen ryhmä vastaan arvioitiin seitsemän eri T. vaginalis-isolaatteja. Testatuista vesiuutteista Verbena sp. (Guachu ka ’ a Mbyá-Guarani kielellä) ja Campomanesia xanthocarpa (Guavira vuonna Mbyá-Guarani kielellä) osoitti, että eniten toimintaa vastaan T. vaginalis, joiden MIC-arvo 4,0 mg/mL saavuttaa 100% tehoa vastaan loinen. Kineettiset kasvutestit osoittivat, että uutteet edistivät täydellisen kasvun poistamista 4 tunnin inkubaation jälkeen., Lisäksi testatut uutteet eivät edistäneet merkittävää hemolyyttistä aktiivisuutta ihmisen erytrosyyttejä vastaan. Tuloksemme osoittavat ensimmäistä kertaa Verbena SP: n potentiaalisen toiminnan. ja C. xanthocarpa vastaan T. vaginalis. Lisäksi tämä tutkimus osoittaa, että alkuperäiskansojen tieto on tärkeä lähde uusia prototyyppi alkueläinlääkkeiden.
1. Johdanto
Trichomonas vaginalis parasitizes urogenitaalisen ihmisen ruoansulatuskanavan aiheuttaen trichomonosis, yleisin ei-virus-sukupuolitauti maailmanlaajuisesti, on vastuussa 248 miljoonaa uutta tapausta vuosittain ., Kolonisaation jälkeen loinen aiheuttaa vaginiittia, virtsaputkentulehdusta ja eturauhastulehdusta . Lisäksi taudinaiheuttaja on liittynyt vakavia seurauksia, niin haitallisia raskauden tuloksia ja ennenaikaisen synnytyksen , lapsettomuus , alttius kohdunkaulan syöpä , ja lantion tulehduksellinen sairaus . Tärkeää on, että trichomonosis toimii kofaktorina ihmisen immuunikatoviruksen (HIV) tarttumisessa ja hankinnassa . Tämän infektion vaikutuksesta huolimatta terapeuttinen arsenaali rajoittaa, ja FDA hyväksyy trichomonosis-hoitoon vain metronidatsolin ja tinidatsolin, molemmat 5-nitroimidatsolilääkkeitä ., Vaikka hoitoaste on korkea, voidaan havaita hoidon epäonnistuminen ja T. vaginalis-isolaattien resistenssi on tärkein syy hoidon epäonnistumiseen . Tässä mielessä, se on epäilemättä välttämätöntä, että tutkitaan uusia vaihtoehtoja hoitoon trichomonosis ja kaksi strategioita voidaan seurata: (i) etsiä uusia terapeuttisia tavoitteita, joka on välttämätöntä järkevä uusien antiparasiittiset aineet ja (ii) tutkimuksessa uusi anti-T., vaginalis-yhdisteet eroavat rakenteellisesti 5-nitroimidatsoleista ja toimivat siten eri mekanismeilla, kuten ryhmämme on osoittanut .
tässä yhteydessä luontaistuotteet, erityisesti lääkekasvit, ovat mittaamattomia voimakkaana bioaktiivisten molekyylien lähteenä. Muinaisista ajoista, ihmiset käyttää kasveja, hoitaa yhteisiä tartuntatauteja, ja jotkut näistä perinteisistä lääkkeistä on edelleen integroitu osaksi parantaa erilaisten patologioiden . Lisäksi etnofarmakologiseen tietoon perustuva haku pelastaa valtavan empiirisen tiedon kasvien hyödyntämisestä ., Tässä yhteydessä, luonnonympäristön ja laajan perintöaineksen osalta, Brasilia on etnofarmakologian kannalta erittäin kiinnostava maa .
alkuperäiskansoilla on runsaasti biodiversiteettitietoa ja he osaavat hyödyntää luonnonvaroja . Huolimatta siitä, että useita lääkkeitä on löydetty kautta perinteisiä parannuskeinoja ja folk tietoa, Brasiliassa on 122 alkuperäiskansojen etnisiä ryhmiä, mutta vain 30% niistä tutkittiin osalta ethnobotanical näkökohtia ., Siksi tutkimus kasveja käytetään alkuperäiskansojen lääketiede on tärkeää yhdistämään perinteisen lääketieteen ja bioottinen ympäristö säilyttää alkuperäiskansojen muinaisen tiedon.
loisalkueläimiä edelleen merkittävä uhka ihmisten ja eläinten terveydelle, ja on olemassa muutamia tehokkaita lääkkeitä hoitoon monia alkueläin sairauksia. Ottaen huomioon alkuperäiskansojen ethnopharmacology myötävaikuttamassa systemaattinen seulonta kasvien kanssa alkueläimiä toiminta, tässä tutkimuksessa arvioitiin anti-T., vaginalis toiminnan tärkeimmistä lääkekasveja käytetään Mbyá-Guarani alkuperäiskansojen lääketieteen sijaitsee Etelä-Brasiliassa.
2. Materiaalit ja menetelmät
2.1. Parasiittiviljelyolosuhteet
tässä tutkimuksessa seitsemän T: n isolaattia., vaginalis käytettiin: 30236 ja 30238 American Type Culture Collection (ATCC); TV-LACM1, TV-LACM2, ja TV-LACM3 (tuoreet kliiniset isolaatit naispotilaiden); TV-LACH1 ja TV-LACH2 (tuore kliinisiä isolaatteja miespuoliset potilaat) kaikki Laboratório de Análises Clínicas e Toxicológicas, Faculdade de Farmácia, UFRGS, Brasilia (hankkeen eettisen hyväksynnän UFRGS Eettisen Tutkimuksen Komitea, numero 18923). Trichomonads olivat axenically viljeltiin trypticase-hiivauute-maltoosi (TYM) väliaineessa (pH 6.0), johon oli lisätty 10% heat-inaktivoitua naudan seerumin ja inkuboidaan 37°C: ssa .
2, 2., Kasvi Materiaali
Kasvien materiaali oli kerätty alkuperäiskansojen heimon Mbyá-Guarani sijaitsee Lomba do Pinheiro, Porto Alegre, RS, Brasilia (30°06’47.62″ S ja 51°07’37.85″ W), Maaliskuussa 2011. Tämä kylä on merkitty Tekoá Anhetenguá (englanti, Totta Kylä), ja 200 ihmistä elää alueella kokoontuivat 40 perhettä. Naiset kylässä on tietoa lääkekasveja käytetty koko väestön ja suoritti kokoelma yksilöitä. Kotoperäisissä infektiotaudeissa rutiininomaisesti käytettäviä kasveja kerättiin kymmenen: Aloe arboresens Millin lehtiä., (ICN 173371), antenni osat Bidens pilosa L. (ICN 167397), antenni osat Rhipsalis baccifera (ICN 167402), haukkuu Luehea divaricata (ICN 167403), juuret Trichilia sp. (ICN 173126), Campomanesia xanthocarpa O. Bergin lehdet. (ICN 167401), Coix lacryma-jobi Linin lehdet. (ICN 167396), lehdet Citrus limonium (ICN 167399), lehdet Citrus reticulata (ICN 173127), ja lehdet Verbena sp. (ICN 167394). Tosite yksilöt olivat talletettu herbarium Universidade Federal do Rio Grande do Sul (ICN).
2, 3., Kasviuutteiden valmistus
tuoreet kasviuutteet valmistettiin alkuperäiskansojen perinteisen käytön mukaisesti keittämällä 60°C: ssa 60 min . Vesiekstraktista olivat kylmäkuivattu, ja työn ratkaisu oli valmis 8,0 mg/mL ultrapuhdasta vettä, steriloidaan suodattamalla (0.22 µm) ja säilytetään -20°C: ssa.
2.4. Anti-Trichomonas vaginalis Assay
Kymmenen vesipitoiset otteita seulottiin in vitro tehoavan T. vaginalis. Määritys tehtiin 96 mikrotiitterilevyllä, joiden lopullinen pitoisuus kaivoissa oli 4,0 mg/mL., Estävä pienin pitoisuus (MIC) määritettiin käyttäen kahdeksanosainen laimennus (4.0–0.031 mg/mL), ja elinkelpoisuuden trophozoites määritettiin mukaan fluorimetric menetelmä . Kaksi valvontaa suoritettiin: negatiivinen kontrolli vain trophozoites ja positiivinen ohjaus 8.0 µM metronidatsoli (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, Yhdysvallat). Kokeet tehtiin ainakin kolmessa itsenäisessä kokeessa, kolmena kappaleena. Tulokset ilmaistiin elinkykyisten trofotsoiittien prosentteina verrattuna hoitamattomiin loisiin.
2, 5., Kasvun Vaikutus Vesipitoiset Otteita
voidakseen tutkia vaikutus aktiivisen vesipitoiset otteita T. vaginalis kasvua, kineettinen kasvukäyrä oli suorittaa käyttämällä ATCC 30236 eristää. Loisten alkutiheys 2,0 × 105 trofotsoiittia / mL inkuboitiin uutteiden kanssa MIC-arvolla TYM-väliaineessa. Trofotsoiitit laskettiin hemosytometrillä 72 tunnin aikana. tulokset ilmaistiin trofotsoiittilukuna (105/mL)., Mikroskooppinen analyysi, ohjaa ja hoitaa loisia olivat sentrifugoidaan 10 min 2000 rpm keskittää organismien jälkeen 4 h inkubaation, ja valmistelu oli havaittu valo mikroskooppi (suurennettu ×1 000: sta), jonka trypan blue dye syrjäytymistä.
2, 6. Hemolyyttinen määritys
tämä määritys suoritettiin Rocha et al: n käyttämän menetelmän mukaisesti. . Veriryhmä O positiivinen terveille vapaaehtoisille oli kerätty Alsever on ratkaisu (1 : 1) ja sentrifugoidaan 2000 rpm 5 min. Punasolufraktio pestiin kolme kertaa PBS 1x: llä (pH 7.,0) ja suspendoidaan uudelleen 1% punasolususpensioksi (v/v). Vesiuutteiden pitoisuudet valittiin herkkyysmäärityksessä määritetyn inhiboivan pitoisuuden (MIC) mukaan. Punasolut inkuboitiin uutteiden kanssa 37°C: ssa 1 tunnin agitaatiolla, minkä jälkeen ne sentrifugoitiin 3 000 kierrosta minuutissa 5 minuutin ajan. Supernatantin absorbanssi mitattiin 540 nm: ssä. Koe tehtiin kolmena kappaleena, ja prosenttiosuus hemolyysin aiheuttama testatusta näytteestä laskettiin verrattuna 100% hemolyyttinen aktiivisuus saponiinia Quillaja saponaria .
3., Tulokset ja Keskustelu
Tässä tutkimuksessa arvioitiin anti-T. vaginalis toimintaa vesiekstraktista 10 lääkekasveja käytetään lääketieteessä järjestelmän Mbyá-Guarani. Mikä tärkeintä, testatuista kasveista löysimme kaksi vesiuuttetta, joilla on voimakas anti-T. vaginalis in vitro-aktiivisuus. Lupaavia otteita on Verbena sp: stä. ja Campomanesia ksanthocarpa. Ote Verbena sp: stä., 4,0 mg/mL, osoitettiin optimaalinen anti-T. vaginalis toimintaa asiakkuutta täydellinen sytotoksisuus (100% loisia kuolema), kun kaikki erillisiä trichomonads eristää (Kuva 1(a))., Lehdet ote Campomanesia xanthocarpa samaan pitoisuus osoitti myös erittäin korkea anti-T. vaginalis toimintaa, vähentää loinen elinkelpoisuus jopa 96% (Kuva 1(b)).
muilla vesiuutteilla oli erilaisia tuloksia. Bidens pilosasta saatu vesiuute poisti trofotsoiittien elinkelpoisuuden kokonaan vain 30236-isolaatin osalta(Kuva 1 (c)). Ote haukkuu Luehea divaricata aiheuttama vähennys T. vaginalis kannattavuuden eri tavalla kussakin trichomonads eristää testattu (Kuva 1(d))., Lehdet Coix lacryma-jobi aiheuttama, keskimäärin 75% elinkelpoisuuden alennus T. vaginalis-isolaattien; kuitenkin, TV-LACH2 eristää, vähennys oli vain 40% (Kuva 1(e)). Tuoreet kliiniset isolaatit miespotilaiden (TV-LACH1 ja TV-LACH2) esitti suurempi herkkyys kuin isolaatteja naispotilailla (ATCC ja tuoreet kliiniset), kun root ote Trichilia sp. testattiin (Kuva 1 (f)). Otteita lehdet Citrus limonium vähentää noin 40% elinkelpoisuuden eristää (Kuva 1(g))., Otteita Aloe arborescens ja Citrus reticulata laskenut kannattavuus 50% vähintään yksi isolaatti (Luvut 1(s) ja 1(en)), kun taas Rhipsalis baccifera vähentää vain 30% kannattavuuden 30236 ja TV-LACM2 eristää (Kuva 1(j)).
verrattuna muihin otteisiin, verbena sp: n otteisiin. ja C. xanthocarpa osoittanut, että useimmat lupaava toimintaa vastaan T. vaginalis, ja pienin estävä pitoisuus määritettiin 30236 eristää (Taulukko 1).,
|
|||||||||||||||||||||
jotta voitaisiin tutkia aktiivisimman uutteen vaikutusta loisten kasvuun ja elinkelpoisuuteen, tehtiin kineettinen kasvukäyrä. Ohjaus esillä klassisen kasvun huippu, kun 24 h inkuboinnin; kuitenkin organismeja käsitellään otteita Verbena sp. ja C., xanthocarpa, sen jälkeen 4 h inkubaation, herätti täydellinen kasvua poistaminen (Kuva 2) ja osoitti ominainen sininen väri trypan blue dye syrjäytymisen osoittaa, solun kuolemaan (Kuva 3).
Automaattinen kasvukäyrä Trichomonas vaginalis 30236 eristää hoidon jälkeen vesipitoiset otteita Verbena sp. ja Campomanesia ksanthocarpa annoksella 4,0 mg / mL. Trofotsoiittien kasvua estivät uutteet täysin 4 tunnin inkubaation aikana., Data represent means ± standard deviation of at least three experiments, all in triplicate.
(a) Control
(b) Verbena sp.
(c) Campomanesia xanthocarpa
(a) Control
(b) Verbena sp.,
(c) Campomanesia xanthocarpa
Mikroskooppinen analyysi loisia morfologia valossa mikroskoopilla (suurennettu ×1 000: sta), jonka trypan blue dye syrjäytymistä. (a) Valvonta; (b) 4 tunnin kuluttua hoidon vesiuute Verbena sp.; (c) 4 tunnin kuluttua hoidon vesiuute Campomanesia xanthocarpa.
tutkiakseen C. xanthocarpan ja Verbena sp: n mahdollista vaikutusta., uutteet loisten kalvo ja myös alustavia tietoja sytotoksisuus vastaan nisäkkäiden soluja, hemolyyttinen aktiivisuus näiden uutteiden tehtiin. Verbena sp. ja C. xanthocarpa otteita testattiin MIC-arvot ja osoittanut, 6.5 ja 7,6% punasolujen hajoaminen, vastaavasti (Taulukko 1). Nämä tulokset osoittivat, että sekä niiden uutteet, klo MIC-arvot, ei edistää merkittävästi hemolyyttinen aktiivisuus, mikä osoittaa, että vaikutusmekanismi vastuussa loinen kannattavuuden vähentäminen luultavasti ei liity loistaudit kalvo häiriöitä., Lisäksi ja mikä tärkeintä, nämä havainnot viittaavat siihen, että molemmat otteet eivät ole myrkyllisiä nisäkässoluissa, koska he eivät hajottamaan ihmisen punasolujen.
Tämä tutkimus auttaa osaltaan pelastamaan kotimaista tietoa lääkekasveista. Kotoperäinen Mbyá-Guarani käyttää Verbena sp. (Guachu ka ’ a Mbyá-Guarani kielellä), kuten teetä, helpotusta oireita tartuntatautien, kuten kuumetta. Tämä on Verbena sp: tä koskevan kirjallisuuden mukaista. infuusiona rauhoittava, kipua lievittävä tulehduksellinen häiriöt, palovammoja, kuukautisia, masennus, ja mahalaukun sairauksien ., Lisäksi tämä laji on erilaisia kemiallisia ainesosia, kuten flavonoidi, iridoid glykosidit, phenylpropanoid glykosidiannoksen, sterolit, triterpeenit, ja glycoconjugate ja biologinen aktiivisuus saattaa osittain johtua niistä . Lisäksi tämä heimo käyttää lehdet C. xanthocarpa (Guavira vuonna Mbyá-Guarani kielellä) hoitoon ripuli, vatsakipu, ja matoja., Tämä kasvi on perinteisesti käytetty etelä-Brasiliassa kuten depurative, antidiarrhoeic, puhdistusaineet, ja reumalääkkeet, ja alentaa veren kolesterolia , ja näitä ominaisuuksia voidaan katsoa johtuvan tanniinit, saponiinit ja flavonoideja (quercetin, myricetin, quercitrin, ja rutiini), yhdisteet läsnä lehdet C. xanthocarpa .
pelastus ethnopharmacology historiallisia käyttää kasveja on tunnustettu arvokas bioprospection, koska heillä on varaa perustelut valinta-ja tutkimus-ja lääkekasveja ., Tämä tutkimus kuvaa ensimmäistä raporttia Verbena SP: n antiprotozoaalisesta toiminnasta. ja C. ksanthocarpa. Lisäksi muita lajeja perheiden Verbenaceae ja Myrtaceae testattiin vastaan T. vaginalis, kuitenkin ilman menestystä . Useat biodiversiteetit ja eri populaatioiden perinteinen tuntemus ovat ohjanneet tutkimuksia etsimään uusia prototyyppejä Anti-T. vaginalis. Viime aikoina on raportoitu caatingasta perinteisesti T. vaginalisia vastaan käytettyjen kasvien potentiaalista . Calzada ym., osoitti, että Meksikon perinteisen lääketieteen urogenitaalisiin traktaattihäiriöihin käytetyt kasvit osoittivat vaikutusta tätä alkueläintä vastaan. Myös Etelä-Afrikan sukupuolitautien torjuntaan käytetyt Amaryllidaceae-lajit osoittivat lupaavaa aktiivisuutta T. vaginalisia vastaan .
Harkitse vaikutusta trichomonosis kansanterveyden ja uutena määrä kestää T. vaginalis-isolaatteja, se on välttämätöntä vaihtoehtoja hoitoon tämän tartunnan. Luonnontuotteet ovat lupaava aktiivisten molekyylien lähde, ja etnofarmakologinen lähestymistapa pelastaa lääkekasvien populaation tuntemuksen., Tämä viisaus yhdistettynä kemiallisiin ja farmakologisiin tutkimuksiin on arvokas arvo innovatiivisten, turvallisten ja helposti saatavilla olevien lääkkeiden biooprospektiossa. Tämä pioneeritutkimus osoitti merkitykselliset tulokset Verbena SP: n anti-T. vaginalis-aktiivisuudesta. ja C. xanthocarpa, kasvit perinteisesti käytetty alkuperäiskansojen Mbyá-Guarani tartuntatautien. Vaikka raportti osoitti voimakasta T. vaginalis-vastaista toimintaa, se pelasti alkuperäiskansojen tiedon välttäen tämän viisauden vääristelyn.,
Kirjoittajien Panos
Clara Lia Costa Brandelli ja Patrícia de Brum Vieira osaltaan myös tätä työtä.
Kiitokset
Tämän työn tukivat NANOBIOTEC-Brasilia ohjelma VIITAT ja FAPERGS. Kirjoittajat kiittää Päällikkö José Cirilo Pires Morinico (heimo Mbyá-Guarani), tehdä mahdollista saavutus tämän tutkimuksen ja arvokasta tietoa. Alexandre José Macedo ja Tiana Tasca kiittävät CNPq: ta tutkijakollegoista.
Vastaa