Tiivistelmä
Tarkoitus. Sarkoidoosi on systeeminen granulomatoottinen sairaus, jonka etiologiaa ei tunneta. Monet kliiniset esityksiä on raportoitu, ja akuutti sairaus on erotettava subakuutti ja krooninen sairaus. Arvaamaton kliininen taudinkulku sai meidät arvioimaan kliininen hyödyllisyys biomarkkeri seerumin havaitseminen sarkoidoosin seuranta. Menetelmä., Seerumin pitoisuuksia chitotriosidase, ACE, KL-6, ja lysotsyymi analysoitiin eri menetelmien väestöstä 74 sarkoidoosi potilaiden (46 steroidi hoito näytteenotto) säännöllisesti seurataan Siena Sarkoidoosi Alueellinen Lähete-Keskus ja hallintalaitteiden ryhmä, jonka tavoitteena on vertaamalla niiden osuutta kliiniseen hoitoon sarkoidoosi potilaiden. Tulos., KL-6 pitoisuudet olivat merkittävästi koholla sarkoidoosi potilaiden keuhkojen fibroosia ja olivat merkittävästi korreloi DLco ja CPI-pisteet, kun taas chitotriosidase oli merkittävästi suurempi potilailla, joilla ekstrapulmonaalinen lokalisoinneissa. Kanssa cut-off-arvo 303.5 IU/ml, KL-6 osoitti, paras herkkyys (78%), kun taas chitotriosidase raportoitu paras spesifisyys (85%) keskuudessa biomarkkereita. Päätelmä. KL-6 on luotettava fibroottisen keuhkojen biomarkkeri sarkoidoosipotilailla., Joukossa biomarkkerit, KL-6 osoitti, paras herkkyys ja seerumin chitotriosidase paras spesifisyys, jopa potilailla, joilla on krooninen steroidi hoito, ja näytti korreloivan ekstrapulmonaalinen lokalisoinneissa.
1. Johdanto
Sarkoidoosi on systeeminen granulomatoottinen sairaus, johon liittyy T-lymfosyyttien ja makrofagien aktivointi ja maahanmuuton vaikuttaa elimet. Vuorovaikutusta antigeenejä ja APC polarizes T-lymfosyyttien T-helper 1 fenotyyppi (Th1), joka johtaa muodostumista sarkoidi granuloomia, joka koostuu T-solut, makrofagit, ja epithelioid ja jättiläinen soluja ., Kurssin sarkoidoosi on arvaamaton: remissio useimmissa tapauksissa,, kun taas jatkuva granulooma, tulehdus voi johtaa fibroottiset keuhkosairaudet . Siksi tarvitaan erityisiä biomarkkereita, joilla on hyvä herkkyys ja spesifisyys, kliinisen tuloksen ennustamiseen ja kliinisten päätösten ohjaamiseen.
ihmisen kitotriosidaasi on aktivoitujen makrofagien ja neutrofiilien erittämä biomarkkeri. Vaikka sen fysiologinen merkitys ei ole selvä, sillä voi olla merkitystä kitiinin ja kitiinin kaltaisten substraattien hydrolyysiin ja hajoamiseen ., Aktiivista sarkoidoosia sairastavien potilaiden seerumissa ja BAL: ssa on raportoitu kohonneita kitotriosidaasipitoisuuksia . Kitotriosidaasi korreloi radiologisten vaiheiden kanssa. Se voi ennustaa kliinisen kurssin, steroidien reagointikykyä ja taudin mahdollisia pahenemisvaiheita . Ei kuitenkaan ole selvää, onko kitotriosidaasi luotettava sarkoidoosipotilaiden hoidossa, joilla on ekstrapulmonaalinen elin.
Angiotensiini-konvertoivan entsyymin (ACE) on hapan glykoproteiini, joka muuntaa angiotensiini I: n osaksi angiotensiini II., Sitä tuottavat keuhkojen endoteelisolut, pääasiassa aktivoituneet alveolaariset makrofagit . Se on koholla sarkoidoosipotilaiden seerumissa ja BAL: ssa, ja sen pitoisuudet korreloivat radiologisten vaiheiden kanssa . Sen hyödyllisyyttä diagnostisena ja ennustavana työkaluna rajoittaa kuitenkin sen vähäinen herkkyys ja spesifisyys. ÄSSÄ voi olla suurentunut tietyissä granulomatoottinen häiriöt (mukaan lukien beryllium ja silikoosi), kilpirauhasen liikatoimintaa, diabetes, ja muita sairauksia .
lysotsyymiä valmistetaan monosyytti-makrofagijärjestelmällä ja granulooman muodostumiseen osallistuvat epitelioidisolut voivat vapauttaa tämän entsyymin., Sarkoidoosipotilaiden lysotsyymipitoisuus on suurentunut alkamishetkellä. Lysotsyymiä pidetään ennemminkin prognostisena indikaattorina kuin diagnostisena työkaluna. Se on alhainen spesifisyys on kohonnut keuhkojen sairaudet, kuten tuberkuloosi ja pölykeuhko .
Krebs von den Lungen-6 (KL-6) on ihmisen korkea-molekyylipaino MUC1 musiini valkuaisen AEC. Sen seerumipitoisuudet ovat koholla useissa ILDs: ssä, mukaan lukien idiopaattinen keuhkofibroosi ja sarkoidoosi ., Vuonna sarkoidoosi, KL-6 korreloi ACE toimintaa: se on pääasiassa kasvanut vaiheessa 2 ja 3 potilailla, joilla skintigrafiset näyttöä myönteisiä keuhkojen kertymistä . Korkea seerumin KL-6 sarkoidoosi heijastavat tuotanto KL-6 johdettu vaurioitunut tai uudistamiseksi tyypin 2 pneumocytes .
tässä tutkimuksessa, vertasimme seerumin eri biomarkkereita kohortin potilaista, joilla on krooninen sarkoidoosi etsinyt korrelaatiot tiettyjen fenotyypit, kliininen esitys, ja lokalisointi.
2. Materiaalit ja menetelmät
2.1., Tutkimus Väestön
Me takautuvasti ilmoittautunut 74 sarkoidoosi potilaiden (27 urosta (36.5%), joiden keski-ikä vuotta) säännöllisesti seurataan Siena Alueellisten Lähete Keskus Sarkoidoosi ja ILDs. Kaikki potilaat diagnosoitiin kansainvälisten ATS/ERS / WASOG-kriteerien mukaisesti. Kaikki olivat olleet seurannassa keskuksessamme yli 2 vuotta diagnoosin jälkeen ja osoittivat jatkuvaa kroonista sairautta. Poissulkemisperusteet mukana potilaita, joilla Lofgren oireyhtymä, akuutti sairauden puhkeamista, spontaani resoluutio, tai seuranta alle 2 vuotta.,
Seerumin näytteenotto suoritettiin ilmoittautuminen: samana päivänä, keuhkojen toimintakokeiden (PFT) ja rintakehän X-ray, jossa säteily lavastus mukaan Scadding kriteerit , tehtiin. Radiologisia luokittelu oli yhteydessä näytteen tunnistus-standardi tavalla, mukaan yleisesti hyväksyttyjen kriteerien mukaisesti: vaihe 0, normaali; vaiheessa 1, kahdenvälisiä hilar adenopathy ilman parenkymaaliset osallistuminen; vaihe 2, kahdenväliset adenopathy ja parenkymaaliset soluttautuminen; vaihe 3, parenkymaaliset soluttautuminen; ja vaihe 4, keuhkofibroosi liittyvät sarkoidoosi., Kaikille potilaille tehtiin korkean resoluution CT rinnassa (HRCT) tarkistaa keuhkojen fibroosia. Kaikki koehenkilöt antoivat tutkimukseen tietoisen suostumuksensa, jonka paikallinen eettinen komitea hyväksyi. Jotta löytää cut-off-arvo, seerumin KL-6 meidän väestö, me kerättiin seeruminäytteet 25 terveillä vapaaehtoisilla (6 miehiä, keski-ikä vuotta), joilla ei ole aiemmin ollut hengityselinten sairaudet, ja ei ota mitään lääkkeitä,
2.2., Keuhkojen toimintakokeet
seuraavat keuhkojen toiminta mittaukset suoritettiin mukaan ATS/ERS-standardin parametrit , käyttäen Jaeger Kehon Plethysmograph kanssa korjaukset lämpötila ja ilmanpaine: uloshengityksen ensimmäisen sekunnin (FEV1), nopea vitaalikapasiteetti (FVC), ja hajanainen keuhkojen hiilimonoksidin (DLCO). Kaikki parametrit ilmaistiin prosentteina ennustetuista arvoista .
2, 3., Kliininen Fenotyypitys
Potilaat luokiteltiin sen perusteella, säteily-keuhko-osallistuminen ja sarkoidoosi lokalisoinneissa mukaan viime Genotyyppi-Fenotyyppi Suhde Sarkoidoosi asiakirja (GenPhenReSa) , sekä komposiitti fysiologisia index (CPI) pisteet. Meillä laskettu KULUTTAJAHINTAINDEKSI vuonna jokainen potilas seuraavan kaavan mukaan, kuten aiemmin on kuvattu : 91 − ( ennustettu DLCO) − ( ennustettu FVC) + .,
Ekstrapulmonaalinen lokalisointi taudin arvioitiin urut-erityisiä diagnostisia reitit: sidokset maksa, perna, luu, luuydin, extrathoracic imusolmukkeet, ja iho olivat kaikki koepala todistettu, kun taas sydämen lokalisointi arvioitiin MR imaging.
2, 4. Chitotriosidase Pitoisuus
Chitotriosidase aktiivisuus määritettiin fluorimetric menetelmää käyttäen 22 µM 4-methylumbelliferyl β-D-N,N,N-triacetylchitotriosidase (Sigma Chemical Co.) sitraatti-fosfaattipuskuria, pH 5.2; 100 µl substraattia inkuboitiin 1 h 37°C: ssa ja reaktio pysäytettiin 1,4 ml 0.,1 M glysiini-NaOH-puskuria, pH 10,8. Fluoresenssi luettiin 450 nm: ssä PerkinElmer Victor X4-fluorimetrillä (magnetointiaallonpituus 365 nm). Kitotriosidaasin aktiivisuus seerumissa ilmaistiin nmol / ml / h. normaaliarvot laskettiin aiempien tutkimusten mukaan .
2, 5. ACE-määritys
ACE-aktiivisuus mitattiin kolorimetrisellä menetelmällä (FAR srl, Verona, Italia) ACE-aktiivisuuden määrittämiseksi seerumissa. Normaali Ace-pitoisuusalue oli 30-80 IU / l .
2, 6. Lysotsyymimääritys
2, 7., Krebs von den Lungen-6 Pitoisuus
Seerumin KL-6 mitattiin NANOPIA® KL-6 reagenssit määrityksessä (Sekisui Diagnostiikka, UK). Periaatteessa määritys on agglutinaation ja sialylated hiilihydraatti-antigeenin näytteiden KL-6 monoklonaalinen vasta-aine, kautta antigeeni-vasta reaktio. Absorbanssin muutos mitataan seerumin KL-6-pitoisuuksien määrittämiseksi. KL-6-pitoisuudet ilmaistaan IU/ml.
2, 8. Tilastoanalyysi
tiedot ilmaistiin muodossa . Ryhmien väliset vertailut suoritettiin Mann-Whitney-testillä ja Kruskal-Wallis-testillä, joiden merkityksellisyys oli asetettu ., Keihäsmiehen testissä etsittiin muuttujien välisiä korrelaatioita. Tilastoanalyysi ja ROC-käyrät tehtiin käyttäen Statistica v 7.0-ohjelmistoa; tietojen graafiset representaatiot tehtiin GraphPad Prism 4.0-ohjelmistolla.
3. Tulokset
3.1. Kliininen, Säteily -, ja Toiminnalliset Parametrit
Demografiset ominaisuudet, keuhkojen toimintakokeiden arvot, ja Scadding säteily vaiheissa väestöstä on raportoitu Taulukossa 1. Kuten odotettiin , ilmaantuminen tapahtui pääasiassa 5. vuosikymmenellä (vuosina), joka oli yleistä tupakoimattomilla naisilla., Lääkinnällisistä historia, 46 potilasta (62%, 17 miestä) olivat steroidihoitoa aikaan seerumin näytteenotto, joiden keskimääräinen annos prednisonia. Näistä kaikki paitsi yksi ottivat suun kautta steroideja yli vuoden ajan. 13 potilasta (3 miestä) olivat immunosuppressiivisia lääkkeitä yhdessä suullisen steroideja (12 metotreksaatin kanssa, 1 kanssa, atsatiopriini). Joukossa steroidi-free-alaryhmä (28 potilasta, 10 miestä), vain kaksi potilasta oli koskaan ottanut erityisiä hoito sarkoidoosi.,
– meidän väestö, PFT parametrit olivat normaalin rajoissa, joilla ei ole merkittäviä muutoksia keuhkojen tilavuudet: 63 potilasta onnistunut suorittaa hyväksyttävän liikkumavaraa DLCO, että oli lievästi heikentynyt, keskimäärin.
3, 2. Vertailu Biomarkkerit
Seerumin KL-6-pitoisuus oli laskettu kaikki potilaat ja terveet vapaaehtoiset; ACE ja lysotsyymi havaittiin seerumin kaikista potilaista. Kuusi potilasta, joilla chitotriosidase toimintaa <10 nmol/ml/s epäiltiin olevan CHIT1 polymorfismi ja jätettiin pois analyysistä.,
Ei ole merkittäviä eroja biomarkkerit tasojen välillä olivat saaneilla potilailla steroideja ja ne hoidettiin steroideja ja immunosuppressiivinen hoito.
KL-6 korreloi merkittävästi ACE: n (; ), lysotsyymin (;) ja kitotriosidaasin aktiivisuuden (;) kanssa (kuva 1).,
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.3. Organ Involvement and Phenotypes
The percentage of sarcoidosis patients showing extrapulmonary involvement was 43.2%., Yleisin ekstrapulmonaalinen lokalisoinneissa olivat ihon (16 potilasta, 21.6%), perna (11 potilasta, 14.8%) ja maksa (5 potilasta, 6.7%). Harvinaisempia lokalisoinneissa olivat silmät (3 potilasta, 4% tapauksista) ja extrathoracic imusolmukkeiden (3 potilasta, 4%); CNS (2 potilasta 2,7 prosenttia tapauksista) ja sydämen, luuston, tai luuytimen osallistuminen (1.3% tapauksista). Sarkoidoosipotilailla, joilla oli ekstrapulmonaalinen vaikutus, oli merkitsevästi suurempi kitotriosidaasiaktiivisuus kuin niillä, joilla oli vähäinen keuhkosairaus (; ) (kuva 3). Muita merkittäviä eroja ei havaittu elinpaikkojen suhteen.,
suhteessa GenPhenReSa fenotyypit, potilailla, joilla on vatsan osallistuminen () osoitti huomattavasti korkeampi chitotriosidase toimintaan kuin ne, joilla on okulaarinen-sydämen-ihon-keskushermostoon (OCCC) (), tuki-ja liikuntaelimistön-ihon (), ja eristetty keuhkojen osallistuminen () (vastaavasti; )., Näissä alaryhmissä ei havaittu tilastollisesti merkitseviä eroja KL-6 -, ACE-ja lysotsyymitasojen välillä.
Mukaan säteily-pisteet, potilailla, joilla on fibrotic sarkoidoosi (vaihe 4) osoitti korkeimmat pitoisuudet seerumista KL-6 verrattuna muihin säteily vaiheissa taudin () (Kuva 4).
4., Keskustelua
Monet biomarkkerit on ehdotettu sarkoidoosi, mutta kukaan ei ole osoittanut, tyydyttävä prognostisia arvo tunnistetaan uusiutumisen nojalla hoidon tai urut lokalisointi. Tässä tutkimuksessa vertailimme erilaisia sarkoidoosibiomarkkereita. Valitsimme krooninen tauti potilaiden hoitoa yli 1 vuosi kliinisten ja demografisia tietoja yhteensopiva yleiset ominaisuudet sarkoidoosi raportoitu kirjallisuudessa . Olemme mukana KL-6 luettelo biomarkkerit, vaikka tämä proteiini on tutkittu IPF ja vähän tiedot ovat saatavilla sen rooli sarkoidoosi., Kiinnostuksemme KL-6: ta kohtaan liittyi sen raportoituun korrelaatioon vaikean fibroottisen keuhkojen osallistumisen ja heikon eloonjäämisen kanssa . Chitotriosidase, ACE ja lysotsyymi osoitti pienempi esiintyvyys väestöstä kuin aiemmin on havaittu, luultavasti koska useimmat potilaat olivat pitkän aikavälin systeeminen hoito steroidit ja ei näytä merkkejä aktiivisesta taudista aikaan seerumin näytteenotto. Päinvastoin KL-6 osoitti väestössämme hyvää herkkyyttä ja spesifisyyttä, jonka raja-arvo oli 303,5 IU/ml., Tietääksemme tämä on ensimmäinen tutkimus tutkimaan erityistä cut-off-arvo, KL-6 krooninen sarkoidoosi vs. ryhmä terve valvonta; kuitenkin, tämä ei ole tärkein tutkimuksen tavoite ja tiedot on validoitava laajemman kohortin potilaista. Meidän havainnot vahvistivat ennustearvo KL-6 fibroottiset keuhkojen osallistumista ja toiminnallinen vajaatoiminta ILD sarkoidoosi potilaiden jo ilmoittanut Miyoshi ym., ; kuitenkin meidän tutkimus on ensimmäinen, joka osoittaa merkittävää korrelaatiota seerumin biomarkkeri, KL-6, ja keuhkojen fibroottiset keuhkojen osallistumista sarkoidoosi potilaiden, kvantifioidaan CPI-indeksi. Lisäksi, tämä havainto on vahvistettu myös merkittävä korrelaatio DLCO prosenttiosuudet, yllä potentiaalinen hyödyllisyys KL-6 mittaukset arvioida sarkoidoosi vakavuus kliinistä hoitoa näille potilaille., Nämä tiedot olivat yhdenmukaiset riippumatta hoidon tila, mikä viittaa kroonisen makrofagien aktivointi reagoi steroidi hoito, erityisesti niillä potilailla, joilla fibroottiset keuhkosairaudet. Mitään merkittäviä eroja KL-6 ilmaisun joukosta löytyi kliinisen fenotyypit ja/tai ekstrapulmonaalinen lokalisointi, mikä osoittaa, että KL-6 voidaan pitää luotettavana ainoastaan keuhkojen osallistumista tauti. Positiivisia korrelaatioita havaittiin keskuudessa sarkoidoosi biomarkkerit, mukaan lukien ACE, lysotsyymi, chitotriosidase, ja KL-6, joka voi siis olla luettelossa prognostisia indikaattorit.,
toisaalta, chitotriosidase osoittautui herkemmäksi kuin ACE, lysotsyymi, ja KL-6 jopa potilailla alle systeemistä hoitoa; se myös näyttää olevan vain biomarkkeri, joka voi heijastaa extrathoracic osallistuminen, mukaan viime GenPhenReSa kliininen fenotyyppi luokitus., Erityisesti, sen ilme on enemmän lausutaan potilailla, joilla on vatsan elinten lokalisoinneissa (maksa ja perna, meidän väestöstä), luultavasti johtuen yliekspressio, jonka aktivoitu asuva makrofagit; nämä tiedot viittaavat siihen, että chitotriosidase voi olla luotettava merkki aktivointi retikuloendoteliaalijärjestelmän vuonna sarkoidoosi, kuten aiemmin on raportoitu potilailla, joilla on lysosomaalinen kertymäsairaus . Kitotriosidaasin prognostisesta arvosta pernan ja maksan sarkoidoosipaikoilla ei ole tutkimuksia, ja tämä on tämän tutkimuksen olennainen uutuus., Toisin kuin KL-6, chitotriosidase toiminta ei näytä korreloivan vakavuus sarkoidoosi keuhkojen osallistumista tai toiminnallinen vajaatoiminta, mikä viittaa siihen, että eri malleja makrofagien aktivointi voi olla läsnä hengityselimiä sarkoidoosi potilaiden ja vaikuttaa biomarkkerit’ ilme .
lopuksi, potilailla, joilla on krooninen sarkoidoosi, vaikea ekstrapulmonaalinen osallistumista, tai vaiheessa 4 fibroottiset vajaatoiminta ovat tärkeä tavoite edellyttävät tunnistaa luotettavia, ennustavia biomarkkereita ennustaa taudin uusiutumisen ja vastaus systeemistä hoitoa.,
näiden pohjalta alustavia tuloksia, korkea chitotriosidase ja KL-6 (ja ei ÄSSÄ tai lsysozyme) havaittiin krooninen sarkoidoosi potilaiden, riippumatta hoidon. Chitotriosidase aktiivisuus oli merkittävästi suurempi potilailla, joilla on useiden elinten osallistuminen, osoittaa lupaavat luotettavuuden arviointi multisistemic sarkoidoosi. Päinvastoin, KL-6 tasoa korreloi fibroottiset keuhkojen osallistumista, CPI-pisteet, ja vähentää DLCO prosenttiosuudet viittaavat rooli kuin merkki vakavuus keuhkosarkoidoosi., Mielenkiintoista, nämä havainnot raportoitiin väkiluku on krooninen multiorgan sarkoidoosi potilaille, mukaan lukien ne, terapiaa, laajentaa luotettavuutta chitotriosidase ja KL-6 myös tässä ympäristössä.
Tietojen Saatavuus
aineistot aikana syntyneet ja/tai analysoida aikana nykyinen tutkimus on saatavilla vastaava kirjoittaja on kohtuullinen pyyntö. Tiedot ovat saatavilla Laura Bergantini ([email protected]) ja Elena Bargagli ([email protected]) tutkijoille, jotka täyttävät kriteerit, jotka koskevat luottamuksellisia tietoja.,
eturistiriidat
kirjoittajat ilmoittavat, ettei heillä ole eturistiriitoja.
Kirjoittajien Osuudet
– Laura Bergantini ja Francesco Bianchi yhtä osaltaan tutkimuksen.
Kiitokset
nykyinen työ tehtiin Sienan Yliopistossa.
Vastaa