en las células y en el laboratorio, se utilizan enzimas llamadas ligasas para unir fragmentos de ADN. Solo los fragmentos de ADN que tienen extremos coincidentes y complementarios se pueden unir por ligadura.
¿cómo actúan las ligasas?
Las ligasas unen fragmentos de ADN catalizando la formación de enlaces entre nucleótidos vecinos.,
de la Ligadura en las células
las Células, naturalmente, llevar a cabo la ligadura durante la replicación del ADN, cuando los fragmentos de Okazaki se unen. Las células también usan la ligadura para reparar el ADN que ha sido dañado, ya sea por el metabolismo celular normal o por factores ambientales, como la luz UV o la radiación. Hasta 1 millón de roturas pueden ocurrir en el ADN de una sola célula humana cada día.,
ligadura en el laboratorio
para que la ligadura de ADN ocurra en el laboratorio, la mezcla de reacción debe contener: fragmentos de ADN complementarios, un ligasebuffer y una fuente de energía. La energía para esta reacción normalmente proviene de una sustancia química llamada ATP (trifosfato de adenosina).
obtención de los fragmentos de ADN
El ADN se prepara para la ligadura al ser cortado en fragmentos con enzimas de restricción. Cada enzima de restricción corta el ADN en un sitio específico y hace fragmentos que tienen extremos «romos» o «pegajosos».,
unir fragmentos de ADN
Las ligasas pueden unir cualquier fragmento de ADN con extremos ‘romos’. También pueden unirse a fragmentos de ADN con extremos ‘pegajosos’, pero solo si los nucleótidos en las hebras son complementarios. Para obtener «extremos pegajosos» complementarios, los fragmentos de ADN a unir deben cortarse con la misma enzima de restricción.
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