La Galleria dell’Accademia ha albergado el David original de Miguel Ángel desde 1873. La escultura fue supuestamente llevada a la Academia por razones de conservación, aunque otros factores estuvieron involucrados en su traslado desde su anterior ubicación al aire libre en la Piazza della Signoria. La intención original era crear un «museo de Miguel Ángel», con esculturas y dibujos originales, para celebrar el cuarto centenario del nacimiento del artista., Hoy en día, la pequeña colección de la galería de la obra de Miguel Ángel incluye sus cuatro prisioneros inacabados, destinados a la tumba del Papa Julio II, y una estatua de San Mateo, también inacabada. En 1939, a estos se unió La Pietà de Palestrina, descubierta en la capilla Barberini en Palestrina, aunque los expertos ahora consideran que su atribución a Miguel Ángel es dudosa.,

otras obras en exhibición son pinturas Florentinas de los siglos XIII y XVI, incluyendo obras de Paolo Uccello, Domenico Ghirlandaio, Sandro Botticelli y Andrea Del Sarto; y, desde el Alto Renacimiento, el modelo de yeso original de Giambologna para la violación de las mujeres Sabinas. Además de una serie de pinturas góticas Florentinas, la galería alberga la colección de iconos rusos reunidos por los Grandes Duques de la casa de Lorena, de los cuales Leopoldo fue uno.