Introducción (E. Coli)

comúnmente conocida como E. coli, Escherichia coli es una bacteria que se encuentra típicamente en varios ambientes, incluidos varios alimentos, suelo e intestinos animales. E. coli es muy diversa y pertenece a la genusEscherichia., Si bien la mayoría de las cepas son inofensivas (y también importantes en el tracto intestinal humano), otras son dañinas y pueden causar implicaciones muy serias para la salud. Un buen ejemplo de esto es E coli 0157:H7.,v>

aparte de la intoxicación alimentaria que puede causar diarrea y otros problemas en el sistema digestivo, las cepas dañinas de E colican causan los siguientes problemas de salud;

  • infección del urinarytract
  • pneumonia
  • enfermedad respiratoria

en el tracto intestinal, E Coli juega un papel importante en que ayuda en la digestión y apoya la absorción de vitaminas vitales de los alimentos en el cuerpo., In addition, it has been shown to bebeneficial in that it prevents the growth and proliferation of other harmfulspecies of bacteria that would otherwise cause health problems.

Main Category of Pathogenic (Diarrheagenic) E. Coli.

  • Shiga toxin-producing Ecoli (STEC)
  • Enterotoxigenic E coli(ETEC)
  • Enteropathogenic E coli(EPEC)
  • Enteroaggregative E., coli(EAEC)
  • Coli de E Enteroinvasiva(EIEC)
  • Coli de E difusamente adherente(DAEC)

tinción de Gram

E. coli se describe como un Gram-negativebacterium. Esto se debe a que se tiñen de forma negativa con el Gramstain.

la tinción de Gram es una técnica diferencial que se utiliza comúnmente para clasificar bacterias. La técnica de tinción distingue entre dos tipos principales de bacterias (gram positivo ygram negativo) al impartir color a las células.,

siendo bacterias gramnegativas, E. coli tiene una membrana externa adicional que se compone de fosfolípidos ylipopolisacáridos. La presencia de lipopolisacáridos en la membrana externa de bacterias le da una carga negativa general a la pared celular. Debido a estas propiedades, E. coli no retiene la violeta cristalina durante el proceso de tinción de Gram.

Ver página de explicar Gram positivas y bacterias Gram negativas

E., Microscopía Coli

para determinar si una cepa(s) está presente en una muestra, es necesario teñir la muestra. Aquí, la tinción de Gram se utiliza ya que ayuda a distinguir entre las bacterias gram positivas y gramnegativas en una muestra.

al ser una tinción diferencial, la tinción de Gram es más compleja en comparación con las tinciones más simples como el metileno blue.As por lo tanto, se utiliza más de una tinción con el fin de diferenciar los componentes celulares its.,

For this technique, 3 different stains are used.These include:

  • Crystal violet
  • Iodine
  • Safranin

Requirements

  • Microscope glass slide
  • A collecting wire loop
  • A heater (Burner)
  • Sample (E., Coli Cultura)
  • agua Destilada
  • tinción de Gram (Cristal violeta,mancha de Yodo y Carbol Fuschin)
  • Alcohol

Preparación de Frotis

  • Antes de recoger la muestra,calentar el bucle de alambre y permiten la refrigeración (para hacer estéril).
  • Usando el lazo de alambre, saque con pala y coloque el cultivo de caldo en un portaobjetos limpio y estéril.,
  • extienda suavemente el inoculum a aproximadamente un centímetro de diámetro (extendiendo la muestra en el portaobjetos)
  • para cultivos de placas (ofbacteria) use un bucle de alambre estéril para soltar solución salina en el Medio/centro del portaobjetos
  • usando otro wireloop estéril (calentar y dejar enfriar), tome una pequeña cantidad de la muestra y revuelva sobre la gota de agua para formar una emulsión

fijación

aquí, el calor se usa para arreglando., El procedimiento de fijación térmica implica los siguientes pasos:

  • secar al aire la diapositiva para que la mancha se seque
  • pasar la diapositiva a través de la llama unas cuantas veces (2 o 3 veces)»0b981310d1″>* durante la fijación térmica, evite el sobrecalentamiento de la diapositiva.,d=»448ac82572″>

    tinción de Gram

    • coloque la diapositiva en el estante de frote con violeta de cristal durante aproximadamente un minuto
    • incline ligeramente la diapositiva andrinse con agua (destilada o agua del grifo) suavemente – Evite lavar áspero theslide
    • inunde la muestra con yodo y permita que la diapositiva permanezca durante aproximadamente 1 minuto
    • div > incline ligeramente la corredera de nuevo y enjuague con agua del grifo o destilada (suavemente).,
    • incline la diapositiva y decolore usando el 95% de etilalcohol/acetona – la decoloración se debe hacer aplicando el alcohol en gotas durante unos 8 segundos
    • enjuague con agua suavemente
    • coloque la diapositiva en el microscopio y vea la muestra

    cuando se ve bajo el microscopio, Gram-negativee. Coli aparecerá de color rosa., La ausencia de esta (de color púrpura) esindicativa de bacterias Gram-positivas y la ausencia de E. Coli Gram-negativa.

    método de caída colgante

    el método de caída colgante se refiere a una técnica que ayuda a examinar organismos pequeños, vivos y sin manchas. Se puede utilizar para tales bacterias móviles como Ps. fluorescens y E. coli.,

    el uso de la técnica de caída colgante también es muy importante ya que ayuda a distinguir entre el movimiento browniano (el movimiento de partículas que están suspendidas en un fluido) y la motilidadde microorganismos., bucle, coloque cuidadosamente un bucle lleno del caldo en el centro del deslizamiento de la cubierta de vidrio

  • gire la diapositiva de vidrio sobre la muestra en el deslizamiento de la cubierta para que la muestra se encuentre entre la diapositiva y el deslizamiento de la cubierta
  • coloque la diapositiva en el microscopio para ver (el deslizamiento de la cubierta debe estar en la parte superior)
  • comience con la potencia más baja y vea la muestra

para determinar si la bacteria se está moviendo realmente, es importante asegurarse de que se está moviendo en diferentes direcciones y cambiando de posición., Esto diferencia la motilidad del organismodel mero movimiento browniano.

vea también: bacterias bajo el microscopio, vea la página Eubacteria, Aprenda más sobre coliformes, cultivo de microscopía y sensibilidad

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